生物质谱技术和方法在蛋白类药物序列鉴定中的应用研究化学工程专业论文.docxVIP

复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 在 前 期 对 标 记 方 法 的 尝 试 和 摸 索 阶 段 ， 先 使 用 六 个 葡 萄 单 糖 聚 合 的 简 单 结 构 的 麦 芽 六 糖 (M alt oh ex ao se ) ，标 记 反 应 完 成 后 分 离 纯 化 除 去 过 量 的 标 记 试 剂 ，浓 缩 后 进 行 质 谱 分 析 。 首 先 使 用 M A L D I一T O F T O F 高 分 辨 质 谱 ， 找 到 分 子 量 增 加 120 .06 D a 的 标 记 分 子 的 加 钠 离 子 峰 ，然 后 使 用 U P L C 一E SI一M S /M S 液 质 联 用 在 线 检 测 ， 糖 链 标 记 前 后 1 : 1 进 样 ，观 测 到 标 记 后 麦 芽 六 糖 的 质 子 峰 信 号 强 度 明 显 增 强 ， 说 明对 于 中 性 糖 的 标 记 是 很 有 效 果 的 ， 结 合 串 级 质 谱 谱 图 ， 进 一 步 确 认 了这 个 糖 链 结 构 ，然 后 把 该 方 法 应 用 到 实 际 N 一糖 蛋 白 的糖 链 上 ， 也 取 得 了 一 定 的 效 果 。 应 用 质 谱 技 术 对 蛋 白类 药 物 的 表 征 ， 包 括 完 整 蛋 白分 子 量 分 析 ， 对 氨 基 酸 的 序 列 分 析 ， 对 各 类 修 饰 ，特 别 是 N 一糖 糖 链 的 解 析 ， 有 助 于 对 蛋 白类 药 物 的 结 构 鉴 定 ， 帮 助 蛋 白仿 制 药 和 原 研 产 品进 行 比较 性 研 究 ， 能 更 真 实 地 反 应 出 两 者 之 间 的 相 似 与 不 同 ， 对 蛋 白仿 制 药 物 分 子 的 鉴 定 也 更 具 体 ，有 针 对 性 ， 更 真 实 可 靠 。 关 键 词 : 质 谱 技 术 ，氨 基 酸 序 列 ，糖 链 的 序 列 ，化 学 修 饰 ，2一A B 衍 生 中 图分 类 号 : 0 65 复 旦 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 A b str a c t A f te r th e b io lo g ie a l m e d ie in e “B io sim ila rs，，，th e ir m o le e u la r str u e tu r e s n e e d to b e e h a ra e te riz e d in o rd e r to m a k e su re th e s im ila rity w ith th e o rig in a l P ro d u e ts ，a n d en su re th e sim ilar q u a lity，a c e u ra e y an d e ffi e a e y . It 15 n e e e ssary to d ete rm in e th e m o leeu lar m ass o f intaet P rotein ，to id en tify th e seq uen ce o f am in o aeid s an d m o d if ie a tio n s su c h a s d isu lf id e b o n d ，g ly c o sy la tio n ，e te . T h e re se a rc h w o rk o f th is m a ste r th e sis m a in ly f o e u se s o n th e e h a ra c te riz a tio n o f tw o k in d s o f b io lo g ie a l m e d ie in e w ith b io m a ss sP e e tro m e try ，m a in ly f or t he d e ter m in a tio n o f in ta c t P ro te in m o le e u la r m a s s a n d th e d e te r m in a tio n o f a m in o a e id s e q u e n e e a s w e ll a s its m o d if ie a tio n s e sP e e ia lly w ith N 一g ly e a n e h a in s . T h e P ro te in u se d in th e se c o n d e h a