产β葡萄糖苷酶细菌菌株的筛选酶的分离纯化及酶学性质的研究微生物学专业论文.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 本论文是基于B．葡萄糖苷酶在天然色素生产方面的作用而进行的研究。该 酶能够水解栀子苷产生京尼平，京尼平与谷氨酸钠等含氨基的化合物反应生成 色泽稳定、无毒无害的天然蓝色素。同时，京尼平本身也是一种天然的交联剂， 可以用于制作人造骨骼、伤口包扎材料，还能够促进胰岛素的分泌，缓解II型 糖尿病的症状。B．葡萄糖苷酶是纤维素酶系的重要组分之一，在植物纤维的降 解中不可或缺，它在食品、饮料、医药等领域有重要的应用价值。例如，它能 用来生产龙胆低聚糖、甜菊糖等低能量、高甜度、易代谢的天然甜味剂；能够 水解茶、葡萄酒和其他饮料中的糖苷类前体物质，从而增加饮料的风味物质； 可以水解大豆异黄酮，增加其在人体中的吸收率，从而有效降低心血管和骨质 疏松等疾病的发病率。 本研究共筛选了7份土壤样品，初筛得到18株能代谢B．葡萄糖苷酶水解栀 子苷的菌株。以pNPG为检测底物进行复筛，选取了一株活性最佳的菌株 ．6C 进行后续实验。经过16S rRNA分析，结合形态学及生理生化特征的研究，该 菌株被鉴定为Bacillus Korlansys 6C菌株于37。C，180 rpm摇瓶发酵24 h，得到7．5 L发酵液。运用中空纤 维素膜超滤，疏水层析、阴离子交换层析及凝胶层析等色谱技术进行分离纯化。 经疏水层析，发现6C菌株能代谢两种B．葡萄糖苷酶，分别记为酶A、酶B。 纯化结束后，酶A的纯化倍数为483．65，回收率为7．24％；酶B的纯化倍数为 316．74，回收率为O．21％。经Native．PAGE和SDS．PAGE电泳检测，确定酶A 分子量约为80 kD，酶B分子量约为90 kD，均由单个亚基组成。 对来源于6C菌株的酶A进行酶学性质研究，发现最适反应pH为7．0，最 适反应温度为40℃；在pH 5-9的范围内，低于50。C的条件下具有很好的稳定 性，超过60℃酶活力迅速降低；酶A的底物专一性不高，能水解多种含B．糖苷 键的底物，但对0【．糖苷键不表现水解作用，其中，该酶的最适底物为oNPG， 测定Km为0．73，对pNPG的水解能力也很强，Km值为2．71。分析9种金属 离子对酶A活性的影响，结果显示Ca2+、Pb2+能够激活该酶的活性，Cu2+、Fe2+ 则抑制该酶活性，其他离子对酶活的影响不大。 关键词B．葡萄糖苷酶，菌种鉴定，芽孢杆菌属，分离纯化，酶学性质 AbstractAbstract Abstract Abstract 13-Glycosidase enzymes played a role in the natural pigment production，this thesis was about the research based on that 13-glycosidase can transfer the gardenin to the genipin．Genipin with sodium glutamate and other compounds contained amino could produce natural blue element which WaS stable，avirulent and harmless．Besides， genipin was a natural crosslinking agent，which can be used for making artificial bone， materials of bandage wound，and alleviating type II diabetes．p-Glycosidase was one of the important components of cellulose，and had all important application value in food，beverage，medical care and other fields．For example，it can be used to produce gentiobiose，steviol glycosides and other natural sweeteners with low energy and high sweetness；to increase the beverage flavor substances by hydrolysis glycoside precursor in tea，wine and other drinks；to increase the soy isoflavones absorption rate in human body,thus can reduce the disease