β葡萄糖苷酶高产菌株选育及发酵条件优化生物工程专业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：f垒建牵签字日期．加，‘年夕月侈日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：彳参姊 导师签名： 签字日期：如f6年夕月，多日 签字日期： 扣一 ／＼趴j盹 日 万方数据 致谢本研究及学位论文是在导师林建平教授的悉心指导下完成的，从论文的选题、实验开 致谢 本研究及学位论文是在导师林建平教授的悉心指导下完成的，从论文的选题、实验开 展到论文撰写与修改等各个方面都倾注了林老师的心血和智慧。导师严谨的治学态度、精 益求精的工作作风、渊博的知识、创新的思维方法使我终身受益；导师兢兢业业、求真务 实、不懈追求的科学精神深深感染并永远激励着我在今后的人生道路上不断奋进；同时， 导师高尚的人格、宽阔的胸怀、谦虚谨慎、平易近人的人格魅力，也让我学到了做人的真 谛。在此，谨向培养我的导师表示衷心的感谢和诚挚的敬意! 本论文的实验过程是在河南天冠集团车用生物燃料技术国家重点实验室和河南天冠 纤维乙醇公司完成的，感谢实验室和纤维乙醇公司的领导和同事们，感谢你们在试验和论 文撰写过程中给予我的帮助。感谢实验室同事赵子高，你扎实的专业功底，丰富的经验十 分令人钦佩，感谢你在整个课题研究过程中给我的提出的宝贵意见，在课题研究中遇到问 题时，经过与你的探讨总能让我找出解决方案。感谢我的大学同学陈忠杰，衷心的感谢你 对我在论文思路设计和撰写中提出的宝贵意见。衷心感谢浙大班的同学金力、米锡耿和杨 付伟，在这几年里我们共同奋战，共同协作，互相帮助，使我的实验顺利进行。 感谢答辩委员会的专家们对我论文的指导! 最后我要特别感谢我的家人，是你们的理解、鼓励和支持才使我全身心投入到实验中， 以顺利完成学业。 万方数据 摘 摘 要 生物能源的开发和应用是我国实现对国际社会碳减排承诺的重要途径之一。鉴于我 国人口多、耕地紧张的现实，利用木质纤维素为代表的非粮生物质生产能源是生物能源发 展的主流方向。 D．葡萄糖苷酶是纤维素酶系中的一种重要组成部分，在纤维素降解中起 重要作用。D．葡萄糖苷酶是纤维素复合酶系降解木质纤维素的限速步骤，提高p．葡萄糖苷 酶的活力，有利于增强纤维素酶体系对纤维素的水解能力。 本研究以黑曲霉(Aspergillus niger，由河南农业大学提供)H12为出发菌株，经过诱变、 筛选，得到一株高产D．葡萄糖苷酶菌株，并对其发酵工艺、粗酶液的水解性能和最适水解 条件进行了研究，获得以下试验结果： (1)以黑曲霉(Aspergillus niger)m2为出发菌株，制备浓度为l x107个／mL的H12孢 子悬液，紫外诱变后的菌液涂布平板进行初筛和两轮复筛，对所得突变株进行10次连续传 代培养，验证其突变株的遗传稳定性和发酵稳定性，获得2株p．葡萄糖苷酶活力较高的突 变菌株A104、A179，发酵水平较出发菌株H12酶活10．42IU／mL分别提高25．6％、23．1％。 随后对A104、A179菌株进行N+注入诱变，获得突变株B135，酶活达12．66IU／mL，进一 步对B135菌株进行紫外线照射和N+离子注入复合诱变，最终获得一株p．葡萄糖苷酶高产 菌株X06，发酵酶活力为16．12IU／mL，较出发菌株H12酶活提高了52．9％，10次连续传代 培养表明，X06的遗传性状和产酶性能稳定。 (2)通过单因素及正交试验研究了X06菌株发酵工艺条件，最优培养基组成：玉米 芯4．O％，酵母粉1．0％，(NI-14)2s04 O．4％，KH2P04 0．4％，MgS04·7H20 0．08％，CaCl2 0．05％， 吐温80 0．03％，微量元素液0．1％。最佳发酵条件：装液量40mL／250mL，接种量6．0％， 初始pH 5．0，培养温度30a，摇床转速220r／min，发酵时间7d，在最优工艺条件下X06 发酵水平达43．66 IU／mL，较优化前酶活16．21IU／mL提高了170．1％。 (3)对X