双水相萃取技术78942.docVIP

双水相萃取技术 (two-aqueous phase extraction) 一、 前言 近年来，随着基因工程、蛋白质工程、细胞培养工程、代谢工程等高新生物 技术研究工作的广泛展开，各种高附加值的生化新产品不断涌现，对生化分离技 术也提出了越來越高的要求。与上游过程相比，目前作为下游过程的生化分离纯 化技术往往存在步骤多，收得率低，处理时间长，重复性差等缺点，这样便严重 阻碍了生物技术的工业化发展。因此，就迫切需要一种分离步骤少，收得率高， 处理时间短，并且易于放大的生化分离纯化技术，双水相萃取技术就满足了这一 需要。特别是基因工程技术的发展，需要从细胞屮提取高质量的遗传物质，由于 细胞破碎后，在溶液中存在人量的轻质细胞碎片，给遗传物质的提取形成了很人 的干扰，通常通过离心分离和溶剂萃取难以得到高纯度高活性的遗传物质，而通 过双水相初步捉取，可以使目标物和轻质碎片得到很好的分离，且目标物的活性 儿乎没有损失。因此双水相萃取技术得到了很大的重视，并口在近20年里取得 了较大的发展。 二、 发展史 双水相萃取技术乂称之为水溶液两相分配技术(Partition of two aqueous phase system) 1、 1896年，Beijernek在琼脂和可溶性淀粉或明胶混合时，发现这种混合 溶液能较快地分为两层，他把这种现象称Z为聚合物的“不相容性” (incompatibility) 体系的发现 2、 1956年瑞典伦得(Luhd)大学的Albertson发现双水相萃取技术可用于 蛋白质的选择分离，但口标蛋白同成相高聚物的分离是影响了其大规模工业应 用。 发现可以用于分离提纯 3、 20世纪70年代中期西德的Kula和Kroner等人首先将双水相技术应用于 从细胞匀浆液中捉取酶和蛋白质，从而大大改善了胞内酶的捉取过程，捉高了酶 的收得率。 利用于活性物质的提取 4、 1989年，Diamond等人以Flory—Huggins理论为基础，推导出生物分子 在双水相体系中的分配模型，但有局限性，仍需继续探索，不断完 善。 开始理论研究 5、20世纪90年代以来，由于控制和优化技术的发展，将生化分离过程进 彳亍集成化(process integration)和将生化反应与分离过程集成化成为了研究热点。 集成化研究 三、 与传统分离方法的比较 在生物发酵产品制备屮，细胞和细胞碎片的除去是整个分离纯化的第一步, 也是最为关键的一步，它将直接影响到后续工序的收得率。传统的分离方法主要 采用离心法及过滤法。这两种方法在实际应用屮都有一淀缺点，如离心法能耗高, 过滤法膜孔容易堵塞。而双水相萃取，整个操作可以连续化，除去细胞和细胞碎 片的同时，还可以起到纯化目标物的作用。各种方法的比较见表A,可以看得出, 在除去细胞碎片的各种方法中，双水相萃取技术是传统的离心分离和过滤法无法 比拟的。 和传统的酶粗分离方法，如盐析，有机溶剂沉淀相比，双水相萃取分离技术 也冇很大的优势。见表B, 一般说来，传统的分离方法达到与双水相萃取相同的 处理量时，需要比双水和萃取多3到10倍的设备，而且比双水和萃取分离方法放 大困难。 虽然双水相萃取技术具有很大的优势，但目前真正工业化的例子却很少。主 要原因是大规模分离时，双水相萃取的成木较高，使得其技术上的优势大打折扣。 大规模分离屮，双水相萃取总成本屮主要是原料成本(90%以上)。原料成本和生 产规模成止比，因而随着生产规模的放大，总成木也增加很大。而传统的分离方 法中，总成本主耍是设备投资，并H设备投资并不与生产规模成正比。因而是的 犬规模生产时双水相萃取技术没有优势可言。因此降低成相物的成本是双水相萃 取技术工业化应用的关键。 四、双水相体系的构成 1、双水相体系的形成 A、 高聚物/高聚物体系 作为一种体系，也就是说它是一个系统，在无外界干扰的情况下，系统的能 量总要趋向于最低状态。对于双水相体系口前主要有两种解释法： 一种认为两种聚合物相互混合时，究竟是否分层述是混成一相，主要取决于 两种因素，即分子间作用力和爛的增加。两种物质混和时爛的增加与涉及的分子 数口有关，同分子大小无关。但分子间的作用力，可以看作分子屮各个基团之间 相互作用力的总和，分子越大当然作用力就越大。可见对于大分子而言决定混合 的结果主要取决于分了间的作用力，而不是爛增。若两种聚合物分了间若表现为 排斥力，即某种分子希望在它的周围的分子系同种分子而非异种分子，则达到平 衡后，就有可能分成两相。若存在引力，或同种分子引力或异种分子斥力不够强, 则会混容或很难形成两相。另外一种就简单的归结为分子间的空间位阻，即在一 定条件下，曲于高聚物分子的空间阻碍作用，无法互相渗透形成均相，具冇相互 分离倾向而形成两项系统。 若从混合前后能量的高低来解释