选修三：动物细胞培养和核移植技术.ppt

定义： 人们通常将动物组织 消化后的初次培养 称为原代培养。 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基） 3、温度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 思考： 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 3、用动物体细胞克隆的动物是通过什么实现的？ 核移植 １、动物的克隆与植物克隆一样吗？ 7.动物克隆实例很多，多莉就举世闻名,他是怎样得到的？ 4：为何常采用减Ⅱ中期的卵母细胞？ 核移植技术，动物细胞培养技术，胚胎移植技术 6：此过程使用了哪些技术？ 此时细胞核靠近第一极体，可用微型吸管一并吸出细胞核和第一极体 5、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不可能！ 因为：一、供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线粒体DNA）来自于受体卵母细胞. 二、生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。 思考题 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 融合后的卵细胞 多莉羊的培育过程 * * 专题2.2动物细胞工程 离体植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 脱（去）分化 再分化 （芽、根） 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 使用的培养基： 固体 有机物（蔗糖） 植物激素 提问： 植物体细胞杂交 植物细胞A 植物细胞B 去细胞壁 原生质体融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物组织培养 植物细胞融合 1、植物体细胞杂交的结果 是产生了？ 2、这个过程中涉及的原理是？ 杂种植株 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理： 为什么要进行动物细胞培养? 细胞增殖 ①原代培养 过程： 放入二氧化碳培养箱中培养 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 ②传代培养 ▲细胞株：传代细胞一般能传到50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 强调：细胞系、细胞株 ▲细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质改变 3、总结：动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 细胞株：一般说遗传物质未改变 细胞系：遗传物质已改变 原代培养 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ ２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？