α亚麻酸和花生四烯酸对hepg2细胞cyp7a1表达的影响及nrf2的调控兽医学基础兽医学专业论文.docxVIP

㈣Ⅷ洲㈣ⅧⅧ㈣Ⅷ川洲Y3022599 ㈣Ⅷ洲㈣ⅧⅧ㈣Ⅷ川洲 Y3022599 H求 一一 目 录 摘要 I 英文摘要 III 1前言 1 1．1非酒精性脂肪肝病 1 1-1．1 NAFLD的发病机制 ．．1 1．1．2脂肪酸与NAFLD的关系 ．2 1．2脂肪酸 一2 1．2．1脂肪酸的分类 2 1．2．2饱和脂肪酸 3 1．2-3不饱和脂肪酸 3 1．2．4 NAFLD与脂防酸 ．．4 1_3核转录凶-T NF．E2相关凶了 ．．4 1．3．1 Nrf2的结构和功能 4 1．3．2 Nrf2与NAFLD ．．5 1．3．3 Nrf2与CYP450酶 6 1．4 CYP7Al研究进展 6 1．4．1 CYP7A 1概述 ． ．．6 1．4．2胆固醇对CYP7A1的调节 7 1．4．3脂肪酸对CYP7A1的调节 7 1．5研究目的和意义 7 2材料和方法 ．．9 2．1试验材料 9 2．1．1试验细胞 9 2．1．2主要仪器设备 9 2．1．3药品和试剂 9 2．1．4溶液配制 ．．】0 2．2试验方法 ．1 2 2．2．1 HepG2细胞的培养 一1 2 2．2．2 ALA和AA对HepG2细胞诱导浓度的选择 1 2 2．2．3瞬时过表达Nrf2细胞模型的建立 1 2 2．2．4瞬时沉默Nrf2细胞模型的建立 14 2．2．5 ALA和AA对HepG2细胞Nrf2和CYP7A1蛋白质表达量的影响 ．】5 2．2．6ALA和AA对HepG2细胞Nrf2和CYP7A1 mRNA表达量的影响 ．16 2．2．7 ALA和AA对Nrf2基凶沉默HepG2细胞CYP7A1表达的影响 ．1 7 2．2．8 ALA和AA对Nrf2基凶过表达Hep62细胞CYP7A】表达的影响 ．18 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论文2．2．9统训学分析 东北农业大学农学硕士学位论文 2．2．9统训学分析 ．．1 8 3结果 ．19 3．1不同浓度的ALA和AA对HepG2细胞活性的影响 ．19 3．2 ALA和AA对HepG2细胞Nrf2和CYP7A1表达的影响 19 3．2．1 ALA和AA对HepG2细胞Nrf2 mRNA表达量的影响 ．．19 3．2．2 ALA和AA对HepG2细胞Nrf2蛋白质表达量的影响 一20 3，2-3 ALA和AA对HepG2细胞CYP7A1 mRNA表达量的影响 一2l 3．2．4 ALA和AA对HepG2细胞CYP7AI蛋白质表达量的影响 22 3．3质粒转染条件的优化 ．23 3．3．1荧光显微镜榆测HepG2细胞质粒转染效率 ．23 3．3_2质粒转染时问对HepG2细胞Nrf2蛋白质表达量的影响 ．．23 3_3-3质粒转染时间对HepG2细胞Nrf2 mRNA表达量的影响 一24 3．4 siRNA转染条件的优化 ．．25 3．4．1荧光显微镜检测siRNA转染效率 ．25 3．4，2不f_』siRNA序列对HepG2细胞N胞沉默效率的影响 ．．25 3．4．3 siRNA转染时间对HepG2细胞Nrf2蛋白质表达量的影响 26 3．4．4 siRNA转染时间对Nrf2 mRNA表达量的影响 27 3．5沉默或过表达Nrf2对HepG2细胞CYP7Al表达的影响 ．28 3．6 ALA和AA诱导对Nrf2沉默或过表达HepG2纲胞CYP7Al蛋白质表达的影响 30 3．6．1 ALA对Nrf2沉默或过表达HepG2细胞CYP7A1蛋白质表达量的影响 ．30 3．6．2 AA刘沉默或过表达Nrf2的HepG2细胞CYP7Al蛋白质表达量的影响 31 3．7ALA和AA对沉默或过表达Nrf2 Hep62细胞的CYP7A1 mRNA表达量的影响 ．．32 3．7．1 ALA对沉默或过表达Nrf2的CYP7A 1 mRNA表达量的影响 ～32 3．7．2 AA对沉默和过表达Nrf2的HepG2细胞CYP7A!mRNA表达量的影响 33 4讨论 ．． 34 4．1细胞系和脂肪酸种类的选择 一34 4．2不l司浓度脂肪酸对细胞活性的影响 ．34 4．3 ALA和AA对Nrf2表达的影响 35 4．4 ALA和AA对CYP7A l表达的影响 35 4．5 Nrf2基因沉默和过表达模型的建专 ．36 4．6 Nrf2沉默和过表达后ALA和AA对CYP7A1表达的影响 ．．37 5结论 38 致谢 39 参考文献 40 攻读硕士学位期间发表的学术论文 49 万方数据 CONIENl CONIENl S CoNTENTS Abstraet in Chinese． ， ． ． ． ．．I Abs