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复旦大学硕士学位论文TFPI．2在子痫前期 复旦大学硕士学位论文 TFPI．2在子痫前期 发病机制中的作用 摘 要 目 的 本研究拟通过临床研究分析正常妊娠和子痫前期孕妇孕妇和胎盘中TFPI．2 的表达特点，从整体水平研究TFPI．2与子痫前期发病的关系；应用RNAi和 转染技术下调／上调滋养细胞中TFPI．2基因表达水平，研究TFPI．2对滋养细胞 增殖、分化、凋亡、侵袭等生物学行为的影响，从细胞水平研究TFPI．2在子 痫前期发病中的作用。 方 法 本研究检测正常非孕妇女，各孕周正常妊娠孕妇血清，产后母胎血清 TFPI．2水平和胎盘表达，与子痫前期比较差异。应用时间分辨免疫荧光分析法 和免疫组织化学法进行检测。采用转染技术上调、下调TFPI．2基因在滋养细 胞株BeWo细胞表达后，评估细胞功能，包括boyden小室观察运动、侵袭能力 的变化，CCK．8法检测增殖能力的变化，Hochest染色、TUNEL法和流式细 胞周期法分析对细胞凋亡的影响，以及应用酶联免疫法检测人绒毛膜促性腺激 素(D．hCG)水平评价分化功能，从而在体外实验中确定TFPI．2基因对滋养细 胞株BeWo细胞生物学性状的影响。 结 果 正常妊娠TFPI．2血清水平随孕周增加而增加，孕39周达最大值 (282．6±17．1ng／m1)，产后立即迅速下降至非孕水平(32．3+7．1ng／m1)，胎盘中 呈现类似变化。子痫前期中TFPI．2血清水平随孕周降低，胎盘表达增加且随病 情进展增高。上调TFPI．2基因表达，BeWo细胞株体外迁移和侵袭能力略下降 QO．05)；下调后其体外迁移和侵袭能力明显增强(po．05)。各组BeWo细胞株 转染2d，细胞活力明显受抑制；4d．8d，随着时间延长细胞活力增加。各时点上 调TFPI．2细胞活力降低；下调后则显著增加(p0．05)。随着TFPI．2基因表达 增加，凋亡指数、TUNEL阳性率随之上升(p0．05)。TFPI．2基因表达对BeWo 细胞株分泌B--hCG能力无明显影响(pO．05)。 5 复旦大学硕士学位论文结 复旦大学硕士学位论文 结 论 1．胎盘是孕期TFPI．2重要来源。 2．TFPI-2对维持正常妊娠有重要作用。 3．滋养细胞中TFPI．2表达抑制细胞侵袭、增殖能力，诱导凋亡，可能是子痫 前期的病因之一。 创新点 1．TFPI．2可能直接或间接影响滋养细胞的侵袭、增生、分化和凋亡等功能， 造成子痫前期的发生，本研究首次具体报道其机制。 2．本课题通过临床研究发现现象(子痫前期与TFPI．2有关)；结合体外细胞 生物学方法研究其机制(Ⅱ甲I．2对滋养细胞生物学行为的影响)，在整体 和细胞水平验证TFPI．2基因在子痫前期发病中的作用。 关键词 组织因子途径抑制物．2子痫前期时间分辨免疫荧光分析法免疫组织化学转 染boyden小室CCK．8法Hoehest染色TUNEL法流式细胞周期法人绒毛 膜促性腺激素 6 复旦大学硕士学位论文The 复旦大学硕士学位论文 The Role of TFPI·-2 in Preeclampsia Pathology Abstract obj ective This study aims to detect the TFPI·2 expression in selun]and placenta by Time-resolved fluoroimmunoassay and immunochemistry,respectively,and analyize the role of TFPI-2 in biology of BeWo cell line，including invasion，proliferation, apoptosis and differentiation． Methods We assessed the plasma TFPI一2 level in non-pregnant，normal pregnant and postpartum women，detected fetal plasma level and expression in placenta,and compared the changes in women、析m preeclampsia．TR-IMFA and immunohistochemistry were used for plasma and placenta tissue detection, respectively．After transfected TFPI-2 gene expression in BeWo cells，cell functions were assessed，including boyden c