parkin介导的线粒体自噬在酸后处理保护缺血性脑损伤中的作用及机制研究药理学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 资助 本研究受以下课题资助 1．国家自然科学基金重点项目 课题名称：中枢组胺及其受体对脑缺血后星形胶质细胞功能和胶质 疤痕形成的作用及其机制研究 2．国家自然科学基金面上项目 课题名称：低糖后处理对缺血性脑损伤的保护作用及机制 3．国家自然科学基金面上项目 课题名称：Nix介导的线粒体自噬在缺血性脑损伤中的作用及与 Synphilin一1相关性研究 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致 谢 光阴似箭、时光流逝，转眼之间五年博士研究生生活即将结束。回首过去， 思绪万千，这几年的博士生活，有过成功的喜悦，亦有过失败的沮丧，有太多的 人和事值得记忆。 首先，衷心感谢我的恩师陈忠教授对我的淳淳教诲和悉心关怀。当我在科学 的殿堂中步履蹒跚时，是陈老师在指点我，“问渠哪得清如许，为有源头活水来”； 当我埋头于文献执迷不悟时，是陈老师在明示我，“纸上得来终觉浅，绝知此事要 躬行”；当我在实际实验中遇到困难时，是陈老师在引导我，“攻坚莫畏难，只怕 肯登攀”。陈老师国际化的视野，前沿而精髓的学术造诣，严谨勤奋的治学风格， 从容、乐观、豁达、以身立行的做人风格不仅使我明白了如何看待事物，懂得了 如何规划自己的人生，而且还明白了许多待人接物与为人处世的道理，深刻影响 着我今后的工作和生活。 衷心感谢范彦英师姐和张翔南师兄，不管是在课题设计，实验技术，还是论文 撰写上，你们都给予我耐心的指导和充分的帮助，使我取得了长足的进步。感谢 实验室张世红、胡薇薇、侯伟伟、蒋磊老师及冯博、汪仪、方琦、许正浩等其他 团队成员对我课题设计提出的宝贵意见。还要感谢袁扬、徐层林、唐杨顺、匡奕 方、王掂、岳佳星等和我一起进入实验室的小伙伴，几年间共同地学习和生活加 深了我们彼此间的理解和友谊，是你们一路的鼓励和帮助，让我走到了今天。感 谢实验室郑艳榕、吴晓丽、邓恬、高洁琼、王颖、廖儒佳、张靖莹、李彦忻等对 我课题的直接帮助和付出的辛勤工作。 感谢上海交通大学徐天乐教授和浙江大学药学院杨波教授对我学--j和实验上 的指导。 最后，我要特别感谢我的父母亲，感谢他们对我精神和物质上的双重支持，感 谢他们的理解以及无微不至的关怀! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 Parkin介导的线粒体自噬在酸后处理保护缺血性脑损伤的作用及机制 研究 浙江大学医学院 药理学 博士研究生 沈哲 导 师 陈 忠教授 中文摘要 缺血性脑卒中是指由于血管狭窄或闭塞造成的暂时性或永久性的脑供血不足 而引起的疾病，具有高发病率、致死率、高致残率等特点。目前对于缺血性脑卒 中的治疗手段依旧非常有限，唯一有效的是利用溶栓剂tPA进行溶栓处理。但由 于治疗时间窗狭窄(4．5 h)和容易引起脑出血等原因限制了其临床应用。很多神经 保护药物尽管在动物模型上能够减轻脑缺血损伤，但在临床上却没有明显的神经 保护作用，所以亟需寻找更为安全有效的治疗手段。 缺血后处理被认为是一种新型的治疗脑缺血的策略，其定义为在缺血再灌早 期给予一个反复夹闭血管的亚致死刺激来激活内源性保护通路。但缺血后处理操 作复杂而且处理时问窗窄，因此探寻更安全有效的后处理方法就尤为必要。 除了缺糖和低氧，组织酸化也是缺血中一个重要的因素。在缺血过程中，组 织的pH会从7．0下降到6．6。有研究发现在离体心脏模型中，酸化再灌可以模拟 缺血后处理带来的心脏保护作用。我们课题组的前期结果发现，酸预处理可以显 著的减少缺血脑损伤。由于缺血的不可预知性，研究酸后处理的神经保护作用就 尤为重要。本研究旨在研究酸后处理的保护作用模式及其机制。 在体缺血模型利用成年的C57BL／6J小鼠进行大脑中动脉栓塞60 min，在再灌 5，50，100 min分别吸入10％，20％或30％C02 5或10 min进行酸后处理。而离体缺 血模型则在原代培养的脑片及皮质纹状体切片上进行氧糖剥夺处理，再灌不同时 间后用C02平衡过的培养液孵育进行酸后处理。我们的结果发现在再灌5 min后 吸入5 min浓度为10％、20％t均C02可以显著的减少缺血引起的脑梗死，并且在再 灌50 min后保护作用仍然存在，提示酸后处理有更宽的治疗时间窗。而利用 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 NaHC03来逆转脑内的酸后可以取消酸后处理和缺血后处理的神经保护作用。并且 无论是在体还是离体模型中酸后处理都可以激活线粒体自噬。并且利用3-MA， Mdivi一1和ATG7小干扰来抑制线粒体自噬都可以逆转酸后处理的保护作用。进一 步我们发现酸后处理可以促进Parkin招募到线粒体上，并且敲除Parkin可以取