不同基底拉伸过程对细胞生长取向的影响及其骨架重排机制探讨生物医学工程专业论文.docxVIP

中文摘耍摘 中文摘耍 摘 要 本文在总结以往研究者工作的基础上，使用生物力学，细胞生物学、免疫组 织化学、计算机图象处理等多种研究方法，对培养的原代血管平滑肌细胞、ECV-304 细胞株施以不同大小、方向和频率的周期性基底拉伸(10％，0．67Hz：0．15％，0．4Hz)， 同时结合使用静态基底拉伸和静态基底松弛的不同组合，研究在不同的力学过程 中细胞生长和取向的调整；微丝、微管骨架的重排；生长和生理行为的变化等。 通过总结实验结果对细胞取向和细胞骨架重排的力信号机制进行了探讨，强调指 出了力学信号引起细胞响应并不完全依赖于化学信号机制，而可通过对细胞骨架 张力的调整直接引起细胞在形态、取向方面的主动响应。主要工作和得出的相应 结论如下： 1．对应用于本文研究的弹性膜圆管膨胀加载装置、四点弯曲梁单向交变等应 变加载装置进行了力学分析，并对其中可能产生不利于实验研究影响的地方作了 校正和处理。针对对各装置加载特点改进对照组设置，对照消除基底拉伸以外力 学因素的影响。 2．用组织培养法原代培养兔血管平滑肌细胞，并利用免疫组织化学方法对其 进行了鉴定。 3．对血管平滑肌细胞施以不同应变率的周期拉伸(最大应变分别为10％、 O．15％)，利用放射免疫法分析血管平滑肌细胞血管紧张素II的分泌；微管吸吮系 统分析细胞与基底粘附力；免疫组织化学方法分析应力纤维的排布；流式细胞仪 分析纽胞分裂指数：利用计算机图象分析系统分析细胞形态和取向结果表明： (1)周期拉伸使平滑肌细胞取向垂直于主应变方向，周期拉伸引起细胞取 向调整存在应变闽值。 (2)周期拉伸对血管平滑肌细胞增殖、表型分化、分泌行为、基底粘附等 生理行为均产生影响。 (3)周期拉伸下细胞取向的发生，与周期拉伸的其他一些生理效应有不同 的机制 4．改变周期拉伸的加载方向，研究血管平滑肌细胞取向的再调整过程，结果 表明：细胞对周期拉伸所引起的取向调整有一定的“记忆”现象。 5．对不同接种形态(圆斑、半平面)的ECV-304细胞施以最大应变10％， 0．67HZ的周期拉伸，用FITC-鬼笔环肽标记微丝、FITC一微管a亚基抗体标记微管， 并利用计算机图象处理系统分析细胞取向、长短径的变化趋势和不同方向上的增 殖和迁移情况。结果表明： 重庆人学博士学位论文1) 重庆人学博士学位论文 1) 周期拉伸条件下，细胞群体形态的重建表现出与细胞个体取向相似的变 化形式，垂直于主应变方向上细胞增殖速度快于应变方向；垂直于主应变方向上 的迁移速度快于主应变方向。 2) 周期拉伸条件下细胞取向的调整与细胞长短径比的变化表现出明确的 相关性；周期拉伸使细胞在应变方向上的截距缩短，在应变垂直向上截距增长； 应力纤维的重排与细胞取向的调整直接相关。 6．基于上述结果本文提出了周期拉伸下细胞取向重排的机制可能是周期拉 伸中的松弛过程使应力纤维在应变方向上解聚，而相对加强了应力纤维在垂直于 应变方向上聚合的假想。 7．为验证上述假想，并分别研究不同力学状态下细胞的取向和骨架重排，将 周期拉伸分解成不同的拉伸和放松过程，设计了一系列对细胞进行拉伸和松弛的 实验，结合参考文献和这些实验的结果可以得出： 1)细胞应力纤维装配在没有其他因素干扰时倾向于沿细胞长轴进行的。周期 拉伸作为刺激因素能激发应力纤维、粘着斑的装配(可能通过力敏感离子通道和 整合素信号系统等化学信号机制)。 2)周期拉伸可看作拉伸过程和放松过程的组合，当细胞受到拉伸时，骨架(应 力纤维)做出相应的调整，应力纤维的原始长度被延长。被延长后的应力纤维， 在周期拉伸的放松过程中会处于松弛状态。 3)当应力纤维受到松弛作用时，会发生解聚和破坏。 4)在周期拉伸过程中，倾向于与拉伸方向平行的应力纤维，松弛的程度明显 高于那些倾向于与拉伸方向垂直的应力纤维，于是它们因松弛而破坏的概率也相 应的高。 5)在松弛破坏应力纤维的同时，周期拉伸促进它们的再装配(这两个效应是 并存的)，这样反复的装配一选择性破坏一再装配的结果，最终使垂直于拉伸方向的 应力纤维占优势，并使得细胞发生取向的调整。 8．提出应力纤维松弛过程的理想模型，并通过分析指出放松后的应力纤维的 张力状态与应力纤维的原始应变率、应力纤维弹性模量、应力纤维与主应变方向 的夹角、应变率有关。 关键词：细胞力学，力信号传导，基底拉伸，细胞骨架重排，取向 lI 茎壅塑窭 茎壅塑窭 一 一一一 ABSTRACT Cyclic stretch of substrate at different magnitude，direction and frequency(1 0％， O．67Hz；0．1 5％，0．4Hz)and diverse combinat