伏隔核组蛋白乙酰化及其介导的基因转录对大鼠可卡因成瘾觅药动机作用的分析药理学专业论文.docxVIP

复旦大学博士学位论文 复旦大学博士学位论文 伏隔核组蛋白乙酰化及其介导基因转录对大鼠可卡因成瘾觅药动机的作用研究 中文摘要嘲嬲 药物成瘾是一种慢性复发性脑病，它以强迫性的觅药行为和不计后果的药物 滥用为特征。个体一旦成瘾几乎没有有效的临床治疗方案，绝大部分患者短期就 会复吸。越来越多的研究表明，成瘾性药物长期滥用导致的关键奖赏脑区基因表 达异常，是成瘾最重要的发病机制之一。 表观遗传学机制介导染色体结构的重构是调控基因表达的重要方式，它通过 改变相应基因启动子区域染色体结构调控基因的转录，其只影响基因表达而不影 响基因序列。组蛋白乙酰化是表观遗传学机制介导染色体重构的重要调节方式， 通常认为基因启动子区组蛋白H3和H4的乙酰化水平升高与基因表达活性增强 相关，而它们的去乙酰化则与基因的表达活性减弱或沉默相关。近年来，很多研 究探讨了染色体重构和可卡因诱导的神经及行为可塑性之间的关系。目前，组蛋 白乙酰化如何参与主动成瘾行为的发生、发展和复发的机制还尚未完全阐明。 自身给药模型是目前国际上广泛应用的研究药物成瘾的动物模型，它是一种 主动成瘾模型，能更好的模拟吸毒患者的整个成瘾过程特别是检测成瘾状态(如 对药物的渴求程度即觅药动机)的改变等；同时它也是研究成瘾药物正性强化的 重要工具模型。本研究采用大鼠可卡因自身给药模型中的固定比率(FR)给药 及递增比率(PR)两种给药方案，研究可卡因成瘾长期发展阶段大鼠伏隔核组 蛋白乙酰化水平及其介导的基因转录活性改变对大鼠可卡因自身给药中成瘾行 为的影响。我们的研究结果显示： 1。丛陋拯盘壑邀洼魁圭圣壁丝酶(旦坠△92塑剑趔缝强太鼠垄亘圭因自复 给药中的觅药动机。每天给予伏隔核壳部核团微注射HDAC抑St]齐lJTSA或SAHA 不仅可以上移实验动物在固定比率(FR)给药方案中的剂量反应和剂量摄入曲 线，而且可以增加递增比率(PR)给药方案下的破发点(Break Point)，动物的 上述行为学表现揭示了成瘾动物觅药动机的增强，而在伏隔核中央部或中央前额 叶皮层核团微注射TSA处理后，均未见上述变化。上述行为学表现提示HDAC 抑制剂对成瘾动物觅药动机增强可能归因于持续HDAC抑制而导致的组蛋白乙 酰化的增加。 2．旦墅△￡塑剑刻上迥懂挂亘±固经厦透昱笪迭随拯壹鄱圣酰丝丞王笪荭 高。我们采用免疫印迹及免疫组化的方法检测了急性可卡因给药及慢性可卡因给 复旦大学博士学位论文 复旦大学博士学位论文 伏隔核组蛋白乙酰化及其介导基因转录对大鼠可卡因成瘾觅药动机的作用研究 药经历诱导的大鼠伏隔核内组蛋白H3和H4乙酰化水平的变化。我们发现，慢 性可卡因经历能够引起大鼠伏隔核壳部组蛋白H3和H4乙酰化水平增高，而这 种乙酰化水平的增高在伏隔核中央部和中央前额叶皮层均不明显；进一步的研究 发现，HDAC抑制剂能够上调慢性可卡因经历诱导的伏隔核壳部乙酰化水平的升 高。上述现象提示慢性可卡因给药经历诱导的伏隔核壳部组蛋白乙酰化的升高与 自身给药中的可卡因觅药动机相关。 3．丛陋迭壶部过盎鲨组量自圭圣醛丝酶垒(塾墅△￡垒2王遢堡丝给药昱塾笪 组量自乙醚丝丞王的荭直差隆低塞验麴物数曼药麴扭。为了更为深入的研究组蛋 白乙酰化改变与可卡因觅药动机之间的关系，我们通过伏隔核壳部过表达 HDAC4的方法来下调慢性可卡因诱导的组蛋白乙酰化水平的增加，进一步观察 其对自身给药中成瘾行为的影响。研究表明，伏隔核壳部过表达全长HDAC4， 而非HDAC催化活性缺失的突变体显著抑制了可卡因诱导的组蛋白乙酰化水平 的增加，同时行为学上表现为固定比率(FR)给药方案中的剂量反应和剂量摄 入曲线的下移以及递增比率(PR)给药方案中的Break Point降低。上述现象说 明，伏隔核壳部HDAC4过表达降低自身给药中的觅药动机，而这种作用是HDAC 催化活性依赖的。然而，伏隔核中央部或中央前额叶皮层过表达HDAC4未见上 述行为学表现。该结果进一步确立了慢性可卡因诱导的伏隔核壳部的组蛋白乙酰 化水平的升高在调控可卡因觅药动机中发挥重要作用。 4．亘盘固曼药动扭生迭陋楂壹酆组蛋白H兰乙醚丝正担差。采用染色质免疫 沉淀(CHIP)的方法研究了慢性可卡因自身给药中伏隔核成瘾相关基因转录激 活水平的变化情况，我们发现慢性可卡因诱导的成瘾相关基因转录激活主要存在 于伏隔核壳部，并且大多数成瘾相关基因的转录激活的由组蛋白H3乙酰化介导。 与此同时，觅药动机的改变与组蛋白H3乙酰化介导的成瘾相关基因转录激活水 平的变化方向一致。该现象提示组蛋白乙酰化对可卡因觅药动机调控作用是通过 调控基因转录活性来实现的，而H3乙酰化介导的成瘾相关基因转录激活可能在 可卡因觅药动机调控中扮演更为重要的角色。 5．丛陋拯壶部工逦鱼巡垡