沉默cxcr4表达对抑制肝外胆管癌的细胞增殖和神经侵犯的研究外科学专业论文.docxVIP

『Ill 『Illl fllll Irll Ilrlll I IIIIll Ifl l PII Y2688638 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作 的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 蜂 日期： 业年三月垡日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许 学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可 以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信 息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网 络向社会公众提供信息服务。 作者繇肄导师签趣丛吼一上月鲨日 万方数据 沉默CXCR4表达对抑制肝外胆管癌细胞增殖和神经侵犯的研究 沉默CXCR4表达对抑制肝外胆管癌细胞增殖和神经侵犯的研究 摘要 第一章肝外胆管癌CXCR4表达及其临床病理特征的关系 背景肝外胆管癌侵袭性高，治疗效果差，根治性切除是其主要治疗 方式。淋巴结转移和神经侵犯是导致肝外胆管癌预后不良的重要因 素。既往报告了趋化因子及受体促进了肿瘤的增殖和迁徙，导致肿 瘤转移和复发。CXCR4是趋化因子SDF一1的特异性受体，在胆管癌 细胞中表达阳性，SDF一1在肿瘤侵袭的靶器官中广泛表达；CXCR4 和SDF。1相互作用促使肿瘤细胞侵袭和定向转移。但是肝外胆管癌 细胞表达CXCR4与其嗜神经侵犯行为的关系有待深入研究。 目的比较不同胆管组织CXCR4的表达差异；分析CXCR4过表达 与肝外胆管癌患者临床．病理因素的关系。 方法收集肝外胆管癌，胆管炎及正常胆管共43例的良、恶性肝外 胆管组织标本，了解不同组织CXCR4表达的差异；记录肝外胆管癌 患者的临床．病理资料，分析CXCR4过表达与其临床．病理因素的关 系。 结果CXCR4在胆管癌组织中的表达率为65．22％，在胆管炎胆管组 织中的表达率为28．57％，正常胆管组织中则无CXCR4表达；CXCR4 只在胆管癌组织中呈过表达。CXCR4阳性表达与胆管癌发生神经侵 犯、淋巴结转移有关。 结论肝外胆管癌组织中CXCR4呈过表达；肝外胆管癌表达CXCR4 与其发生神经侵犯及淋巴结转移相关。 第二章肝外胆管癌细胞的体外侵袭和神经侵犯模型研究 背景观察肝外胆管癌嗜神经侵犯过程目前缺乏简单有效的体外模 型。诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞，并建立神经细胞一胆管癌 细胞共培养体系能够模拟肝外胆管癌细胞神经侵犯的局部微环境， 用于观察其嗜神经侵袭过程。 目的诱导并鉴定人胚胎干细胞向成熟人神经细胞定向分化；建立胆 管癌细胞神经侵犯的体外模型。 方法应用RA和GDNF刺激诱导胚胎干细胞定向分化为神经元和神 万方数据 经胶质细胞。免疫细胞染色法检测培养获得的细胞表达SYN和 经胶质细胞。免疫细胞染色法检测培养获得的细胞表达SYN和 GFAP表达。将诱导获得的神经细胞与胆管癌细胞在Transwell小室 中共培养。观察胆管癌细胞侵袭和嗜神经生长的现象；t检验比较 实验组及对照组的神经细胞对胆管癌细胞的侵袭性的影响。 结果胚胎干细胞定向诱导4天后能获得的为神经元样细胞、神经胶 质样细胞的混合细胞，分别表达SYN、GFAP阳性，成为成熟神经 细胞；神经细胞一胆管癌细胞共培养模型能观察到胆管癌细胞嗜神经 生长的现象，共培养组胆管癌细胞的侵袭性显著增强(pO．05)。 结论RA+GDNF诱导人胚胎干细胞可获得成熟神经元和神经胶质 细胞；人神经细胞一胆管癌细胞共培养的体外模型能够模拟胆管癌神 经侵犯现象。 第三章沉默CXCR4表达抑制肝外胆管癌细胞株增殖和神经侵犯 背景CXCR4在多种肿瘤细胞中过表达，与肿瘤细胞的增殖、转移密 切相关；SDF．1在神经细胞中表达阳性，其受体CXCR4在诱导肝外 胆管癌嗜神经侵犯行为的作用机制值得深入研究。RNA干扰技术利 用siRNA特异性阻断靶基因转录和翻译并促其降解，是研究基因功 能的有效方法。采用RNA干扰技术有利于研究CXCR4表达在胆管 癌细胞中的生物学作用。 目的研究沉默CXCR4对肝外胆管癌细胞增殖、侵袭和嗜神经侵犯 的抑制作用。 方法采用Lipofectamine 2000法将CXCR4一siRNA转染进入肝外胆 管癌细胞，荧光显微镜下观察转染效率；Western blot和real—time PCR 试验检查胆管癌细胞表达CXCR4蛋白及CXCR4一mRNA水平。Elisa 法验证