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PAGE PAGE \* MERGEFORMAT 1 选修3《现代生物科技专题》 专题1 ? 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望（定向变异），进行严格的设计，通过 体外 （体内、体外）DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物 类型 和生物 产品 。基因工程是在 分子 水平上进行设计和施工的，又叫做 DNA重组 技术 。 基因工程技术的原理： 基因重组 基因工程的优点：（1）目的性强，能够定向的改变生物的品质。（2）克服远缘杂交不亲和。 1.1 基因工程的基本工具 1.“ 分子手术刀 ”——限制酶（全称：限制性核酸内切酶） （1）主要来源： 原核生物 。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列（被识别序列具反向对称特点），并且使每一条链中 特定 部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 黏性 末端和 平 末端。 （4）与解旋酶的区别： 解旋酶：断开碱基对间 氢键 限制酶：断开两个脱氧核苷酸之间（即磷酸与脱氧核糖之间）的 磷酸二酯键 2.“ 分子缝合针 ”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶）的比较： ①相同点：都连接 磷酸二酯 键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶：只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶：连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“ 分子运输车 ”——运载体 （1）运载体具备的条件：①具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ②能在受体细胞中复制并稳定保存。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ④能在受体细胞中稳定保存（对受体细胞无害），大小合适。 （2）最常用的载体是 质粒 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的很小的双链 环状 DNA分子。 （3）其它载体： λ噬菌体的衍生物 、 动植物病毒 。 （4）在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 1.2基因工程的基本操作程序 步骤：1、 获取目的基因 ， 2、 基因表达载体的构建 ， 3、 将目的基因导入受体细胞 ， 4、 目的基因的检测和鉴定 。 第一步：获取目的基因 1.目的基因范围：编码蛋白质的基因、具有调控作用的因子。 2.目的基因来源：自然界获得或人工合成 自然界获得：采取直接分离法用适当的限制酶处理得到。工作量大，多为原核基因来源。 人工合成： 反转录法 和化学合成法。操作复杂，基因结构不完整，多为真核基因的来源。 补：基因结构 原核基因、真核基因均有两种区域： 编码区 、 非编码 。但真核基因的前者是不连续的，分为 外显子 和 内含子 。 3.目的基因的（大量）获取方法 （1）从基因文库获取 A.基因文库分类：基因组文库、 部分基因文库 B.获取方法：据 目的基因 的有关信息，以及基因的表达产物蛋白质等特性。 C.两种文库中目的基因的来源： 基因组文库的目的基因来源于 自然界直接分离法获得 。 cDNA文库的目的基因来源于 反转录法人工合成 。 D.两种文库中目的基因的区别：书P10表格 （2）PCR( 多聚酶链式反应 的缩写)技术.(发明人：穆里斯等人) A.原理： DNA双链复制 B.特点： 体外 复制， 指数 增加， 需要 （需要、不需要）模板。 C.过程： 第一步：高温解链（变性）：加热至90～95℃，双链DNA受热解成单链（不需解旋酶）； 第二步：低温引物（复性）：冷却到55～60℃，引物与模板单链DNA互补结合； 第三步：中温复制（延伸）：加热至70～75℃，热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 第四步：重复一至三步。 D.所需条件：模板为 目的基因 ，原料为 四种脱氧核苷酸 ，酶为 热稳定DNA聚合酶 ，能量由 ATP 直接