臭氧自体血回输对急性脑缺血神经保护作用的影响的相关研究神经病学专业论文.docxVIP

博士学位论文目的 博士学位论文 目的 1．通过功能评分、Hoechst染色、免疫组织化学、免疫印迹及氧自由基生 化检测等方法，初步探讨臭氧自体血回输对大鼠脑缺血急性期运动功能恢复、 缺血脑组织凋亡及氧自由基损伤的影响。 2．采用NIHSS评分及MEP的方法评估，明确臭氧自体血回输对急性脑梗 死患者临床运动功能恢复的影响。 研究方法 1．动物实验部分 1．1建立臭氧自体血回输治疗大鼠MACO模型及分组 选取3月龄250—2809雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，使用线栓法建立MACO 模型，给予随机分组，分为假手术组、缺血对照组及缺血治疗组，每组18只。 缺血治疗组在术后12h取大鼠尾源静脉血2 ml置于回输专用注射器中，与预先 设定的臭氧浓度(47 pg／m1)按1：1的比例混合5．10分钟后，将血液经尾源静脉 回输，每12小时一次，治疗6次。 1．2神经行为学评分 在术后12h及第6次臭氧自体血回输治疗12小时后，通过Longa法进行神 经行为评分。 113凋亡检测 神经行为学评分后，处死大鼠后取材，通过Hoechst染色、Tunel染色、免 疫组织化学及免疫印迹的方法，分别检测缺血皮层的凋亡情况，同时检测凋亡 相关蛋白Bcl．2、Bax、Caspase．2在缺血脑组织的表达情况。 1．4氧自由基的检测 神经行为学评分后，处死大鼠后取材，使用相应试剂盒检测缺血脑组织超氧 化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA) 的含量。 III 万方数据 中文摘要2．临床试验部分 中文摘要 2．临床试验部分 2．1研究对象：试验纳入急性脑梗死患者86例(男58例，女28例)，随机 分为对照组43例及臭氧治疗组43例。两组基础用药均为拜阿司匹林肠溶片0．39 1／晚邯可托伐他汀钙片20mg，1／晚，臭氧治疗组除药物及康复治疗外给予臭氧自 体血回输治疗，1／H，10天一疗程；对照组仅给予药物及康复治疗。 2．2病例选择标准： 2．2．1入组标准：①年龄在30～80岁之间；②CT或磁共振检查排除脑出血、 TIA以及由脑肿瘤、脑外伤、脑寄生虫病、代谢障碍等引起的卒中患者，证实为 急性脑梗死患者；③入院后予NIHSS评分，分数在4～20分之间；④发病时间 小于72小时大于6小时以上且不能进行静脉溶栓及动脉取栓的患者。 2．2．2排除标准：①严重卒中患者，例如多脑叶梗死(CT低密度影大于l／3 大脑半球)；②已进行溶栓治疗的患者；③休克、生命体征不平稳、严重心肺并 发症及肝肾功能不全患者或预期寿命不超过1个月的；④凝血机能障碍或血小 板量及功能异常的患者，地中海贫血、镰状细胞性贫血患者，葡萄糖一6一磷酸 脱氢酶缺乏症即蚕豆病患者；⑤症状未控制的甲状腺功能亢进；⑥高敏体质； ⑦使用激酶类药物、抗自由基制剂的患者；⑧妊娠期或哺乳期妇女；⑨因不适 合行MEP检查者：既往安装起搏器及有癫痫病史患者。⑩依从性差，不能遵嘱 完成相关检查、治疗、记录的患者。 2．3检测方法： 2．3．1临床功能评分：分别于治疗前及治疗10天后，对两组患者使用NIHSS 评分评估患者临床功能变化。 2．3．2氧自由基检测：分别与治疗前及治疗10天后，给予患者抽血，使用生 化试剂盒，对患者血清一氧化氮(nitric oxide，NO)、SOD、MDA进行检测。 2．3．3 MEP检测：采用KeypointR．net全功能肌电诱发电位仪以及MagPro磁 刺激器，进行运动诱发电位检查，刺激线圈为圆形刺激器。患者分别采用仰卧 位及坐位，使用磁刺激器在皮层功能区及颈7神经根／腰5．骶1神经根处进行刺 IV 万方数据 博士学位论文激，表面电极记录，记录部位上肢为拇短展肌，下肢为胫骨前肌。 博士学位论文 激，表面电极记录，记录部位上肢为拇短展肌，下肢为胫骨前肌。 3．统计学方法：采用SPSSl6．0软件进行统计分析，正态分布数据以(x姆) 表示，以‘‘M(，洲”表达呈偏态分布的数据。计数资料比较采用妒检验；等级资 料采用等级相关秩和检验；计量资料，组内比较采用配对t检验，治疗前后组间 趋势比较采用多因素方差分析，方差不齐采用Wilcoxon秩和检验；指标间相关 性分析采用spearman秩相关分析。P0．05为差异有统计学意义。 结果： 1．动物实验结果 1．1神经行为学评分 给予线栓法制作的MCAO大鼠，神经行为学评分均在1～3分。在治疗3 天后，缺血对照组及缺血治疗组较术后12h的评分明显下降(氏0．05)，缺血治 疗组较缺血对照组评分下降更明显(P0．05)。 1．2凋亡检测 1．2．1 Hoechst染色：观察治疗3天后的各组缺血皮层细胞的HoechSt染色， 可以看到大量的