传染性法氏囊病病毒对cef细胞某些基因表达的影响和传染性喉气管炎病毒的重组生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国农业大学博二L学位论文或F52fT0攻毒的鸡的法氏囊中，不能检测出wlBDV币l 中国农业大学博二L学位论文 或F52fT0攻毒的鸡的法氏囊中，不能检测出wlBDV币l F52／70，只在一些鸡中检测出D78。此 方法可应用于IBDV的分型，也可以对同一组织中不同类型的IBDV进行定量研究。实验结果对IBDV 的致病性和IBDV与宿主相互作用研究提供了重要的参考信息。 第二部分： 实验克隆了中国lLl‘V E2株的带侧翼序列的TK基因，得到质粒pCRT-兀lK，并进行序 列分析。然后用AccIII和Van91I删除TK基因内部677 bp的序列。在此删除位点分别插入 CMV-GFP—polyA和SV40-GFP-polyA表达盒分别得到质粒pFTK-SG和pFTK-SG。将新城疫融合 基因(F)分别插入到质粒pFTK-CG和pFTK-SG中的GFP的上游，与GFP构成融合表达框，得 到质粒pFT-CFG和pFT_SFG。另外，构建TK缺失的不带外源基因的重组质粒pFTKD。用质粒 pFTK-CG pFTK-SG,pFT-CFG和pFT-SFG与ILTV基因组DNA共转染LMH细胞和鸡原代肝细 胞，用荧光显微镜检测带荧光的ILllV重组子。病毒重绸子在鸡原代肝细胞中传第二代时，还可 见到荧光，说明带GFP和F-(3FP的重组ILTV在转染时已经产生。发现CMV启动予比SV40启 动子有更强的启动效率。重组子的纯化与性质测定有待进一步鉴定。 第三部分： 应用RT-PCR结合探针杂交的方法对新城疫病毒(NDV)进行分型。先用感染NDv的鸡胚尿 囊液建立实验方法，再用感染鸡的组织进行该方法的应州效能检测。VC22是毒力株特异探针， NC22是非毒力株特异探针．用地高辛(DIG)标记探针3’端．在尼龙膜上与NDV RT-PCR产物进 行斑点杂交。两个探针能很好的区分来自感染鸡胚尿囊液的NDV，并可区分感染组织中的NDV 强弱毒。对各毒株的杂交检测结果与脑内致病指数(ICPI)判定的强弱毒结果相一致，整个检测 过程可在j天内完成。实验对两个探针的特异性和NC22的灵敏度进行测试．NC22能检测到将107。5 EIDso，ml的La Sota毒株稀释到104稀释度或800龟的病毒RNA。本系统在临床样品的检测上有一 定的麻用价值。 关键j司：传染性法氏囊病病毒，定量实时RT—PER，基阅表达。传染性喉气管炎病毒，重组 新城疫病毒，分型 SummaryThere Summary There three sections in this dissertation：1)quantification of gene expression in chicken embryo fibroblasts(CEF)and virus load in bursal Fabricius(BF)infected with infectious bursal disease viius 0BDV)．the recombination of infectious laryngotraeheitis virus 0LTV)and pathotyping ofNewcastle disease virus(NDV)． Section IBDV disease in chickens characterized by immunosuppression and high mortality． Quantitative real time nmtscfipfion polymerase chain reaction(RT-PCR)has been previously applied Sensitive，reproducible and rapid method for detection and quantification ofnucleic acid．In this study,quantitative real time transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)was applied determine expression gene which could be used internal control quantify gene expression and virus load,and then study virus replication and gene expression ofCEF cells infected with IBDV,as well as quantify IBDV in bursa of Fabricius and feces，which taken from chick