光动力疗法对mrsa及其生物被膜作用的体外实验研究康复医学与理疗学激光医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 解放军医学院硕士学位论文攻读学位期间发表文章情况 解放军医学院硕士学位论文 攻读学位期间发表文章情况 ．．62 致谢 万方数据 万方数据 解放军医学院硕士学位论文CFU 解放军医学院硕士学位论文 CFU Colony Forming UBits 菌落形成单位 Xr丌 xtt sodium c；3，3’．【1．(苯氨酰基)-3，4一四氮唑】一 二(4．甲氧基．6一硝基)苯磺酸钠 G十 Gram Positive 革兰阳性 MCF McFarland 麦氏浊度单位 N珏lA Mueller-Hinton agar 水解酪蛋白培养基 OD Optical Density 光密度 SAU Staphylococcus 金黄色葡萄球菌 NⅡ峪A Methicillin-resistant Staphylocoecus 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 PBS Phosphate Buffered Sflme 磷酸盐缓冲液 PDT Photodynamic Therapy 光动力疗法 PS Photosensitizer 光敏剂 ROS Reactive Oxygen Species 活性氧 P P【(C37H42C12N40)】 亚苄基环戊酮化合物 P2．PDT P2 Mediated Photodynamic Therapy 光敏剂P2介导的光动力疗法 解放军医学院硕士学位论文 2 解放军医学院硕士学位论文作 解放军医学院硕士学位论文 作 者：叶祖林 学科专业：康复医学与理疗学(激光医学) 导 师：顾瑛 光动力疗法对MRSA及其生物被膜作用的体外实验研究 中文摘要中又捅要 目的研究新型光敏剂亚苄基环戊酮化合物(P2)介导的光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及其生物被膜的体外作用。 方法 (1)将3株MRSA临床菌株配制成浓度为2 10sCFU／ml的细菌悬液，与浓度为 5、10、20、50 laM的光敏剂P2溶液等体积混匀，孵育30 min，用波长为532 nnl、 功率密度40 mW／cm2的连续激光照射10 min，能量密度为24 J／cm2。并设空白对 照组、单纯光敏剂组及单纯光照组。每组3个样本，重复3次。处理后即刻采用 稀释平板法进行菌落计数，评价P2．PDT对MRSA浮游菌的体外杀伤效果。 (2)培养MRSA0生物被膜，按方法(1)进行P2一PDT处理(P2浓度为10 1．tM)。 处理后，采用SYT09(标记活细菌，显示绿色荧光)、PI(标记死细菌，显示红色 荧光)荧光探针标记膜内细菌，通过激光共聚焦显微镜观察生物被膜内细菌的死 亡情况。培养MRSA0生物被膜，按方法(1)进行P2．PDT处理(P2浓度为10、 25 l,tM)，并设空白对照组、单纯光敏剂组及单纯光照组。每组6个样本，重复3 次。处理后，采用xTT法检测生物被膜内细菌的存活率。 (3)培养MRSA0生物被膜，按方法(1)进行P2．PDT处理(P2浓度为10、25 I．tM)。 采用结晶紫染色法光镜下观察生物被膜致密度、菌落形态以及网状结构的变化， 并用酶标仪定量检测生物被膜的破坏程度。采用FITC—Cona(产生绿色荧光)荧光 探针标记被膜中的多糖，通过激光共聚焦显微镜观察多糖的变化。在微孔滤膜管 内培养MRSA0生物被膜，按方法(1)对其进行P2．PDT处理(P2浓度为10 1．tM)， 处理后加入10 pedml左氧氟沙星(Levofloxacin,LVFX)溶液400 pl，孵育6小时 后采用高压液相色谱仪检测透过生物被膜的LVFX的浓度。并设空白对照组。每 3 解放军医学院硕士学位论文组6个样本。 解放军医学院硕士学位论文 组6个样本。 (4)P2．PDT与LVFX联合杀伤生物被膜内细菌在96孔板中进行，按方法(1) 对MRSA0生物被膜进行P2．PDT处理后(P2浓度为10 gM)，分别加入浓度为10 ．g／ml与20．g／ml的LⅥ1X溶液，24 h后xTT法检测生物被膜内细菌的存活率。 并设空白对照组、单纯LVFX组及单纯PDT组。每组6个样本。比较各组细菌存 活率。 结果 (1)P2．PDT对3株MRSA临床菌株均有不同程度的杀伤作用。当光敏剂P2浓度 为5 1．tM时，3株MRSA临床茵株的菌落数均下降3 109lO r：z．L，达到有效杀伤；P2 浓度为10 rtM时，达到最大杀伤。 (2)激光共聚焦显微镜观察到，经P2．PDT处理的生物被膜内绿色荧光的平均强 度(299．84 a．u．±53．39 a．u．)明显弱于对照组(485．44 a．U．±120．21 a．u．)(P0．01)， 在绿色荧光与红色荧光的混合图像中，绿色荧光所占比例