β防御素及toll样受体参与分泌性中耳炎发病的体内研究耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

中文摘要第一部分 中文摘要 第一部分 B一防御素在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室的表达 目的 检测rBD一1、rBD-2 mRNA在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室粘膜中的表达，初 步探讨B一防御素在分泌性中耳炎发病机制中的作用。 方法 排除中耳感染的清洁级SD大鼠48只，随机分为4组，每组12只。前3组 36只行颈部切口经右侧听泡注入脂多糖溶液(1mg／m1)30 u L，造模后分别于1、 3、7天断头取咽鼓管鼓室粘膜；对照组12只大鼠右侧听泡注入生理盐水30 u L， 左侧听泡作为空白对照组，与造模3天组同时取咽鼓管鼓室粘膜。 逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测咽鼓管鼓室粘膜rBD一1、rBD一2在mRNA 水平的表达，Image J软件分析电泳图并进行半定量。 结果 正常SD大鼠咽鼓管鼓室粘膜存在rBD-1、rBD-2 mRNA的表达，rBD-1 mRNA 的相对表达量较rBD-2 mRNA强(尺O．01)。造模后1、3、7天，rBD一1 mRNA表 达变化不明显，rBD一2 mRNA表达在造模后1、3天增加明显(尺0．01)，第7天 渐回复到正常水平。 结论 在sD大鼠，rBD一1可能参与正常咽鼓管鼓室的防御功能，造模后rBD-2的 表达增加可能与病原体入侵后的清除相关。 【关键词】 0一防御素；分泌性中耳炎：大鼠；脂多糖 2 中文摘要第二部分 中文摘要 第二部分 TLR-2、TLR-4在分泌性中耳炎小鼠咽鼓管鼓室的表达 目的 用PAF诱导BALB／c小鼠分泌性中耳炎模型，检测造模前后TLR一2、TLR一4 在咽鼓管鼓室粘膜的表达，探讨PAF、TLR与分泌性中耳炎发病之间的关系。 方法 SPF级BALB／c小鼠50只，排除中耳感染，随机分为5组，每组lO只。前4 组经双侧鼓膜注入PAF 5u L(1“g)制作分泌性中耳炎小鼠模型，造模组8只 小鼠分别于1、3、7、10天断头取咽鼓管鼓室粘膜；对照组8只小鼠右侧听泡注 入生理盐水5 u L，左侧听泡作为正常对照组，与造模7天组同时取咽鼓管鼓室 粘膜。每组另2只小鼠取听泡固定并脱钙后制作冰冻切片，行HE染色观察造模 后组织学变化。逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)，蛋白质印迹(western—blot) 检测小鼠咽鼓管鼓室粘膜TLR一2、TLR一4的表达；免疫荧光(冰冻切片)确认TLR一2、 TLR一4表达的具体部位。 结果 PAF 1 u g经鼓膜注射诱导的BALB／c小鼠分泌性中耳炎，炎症可持续10天。 正常BALB／c小鼠咽鼓管鼓室粘膜存在TLR-2、TLR一4 mRNA的表达，两者相对表 达量比较差异不显著；PAF诱导后两者表达均增强，造模前后的表达差异有显著 性(尺0．01)；western-blot证实炎症粘膜中TLR一2，TLR一4在蛋白水平的表达 高于正常粘膜(尺0．01)；免疫荧光显示TLR一2、TLR一4广泛表达于鼓室粘膜，在 炎症鼓室粘膜中表达有增强(尺0．01)，咽鼓管粘膜中主要为TLR一2绿色荧光， 鼓膜及中耳腔炎症细胞表面主要为TLR一4红色荧光。 结论 PAF在中耳粘膜诱导TLR-2、TLR一4表达上调，PAF诱导的分泌性中耳炎小鼠 模型可用以进一步研究PAF、TLR在分泌性中耳炎发病中的具体作用及相互联系。 【关键词】Toll样受体；分泌性中耳炎；小鼠；血小板活化因子 AbstractPartone Abstract Partone Expression of p-defensin mRNA in a rat model of otitis media with effusion induced by LPS Obiective：To compare mRNA of rBD-1、rBD-2 in normal tubotympanum and inflammatory mueosa induced by lipopolysaccharide(LPS)，which can be a foundation for further investigating the role of beta-defensin in the pathogenesis of otitis media with effusion． Methods：A total of 48 Sprague-Dawley rats(200-2509)，free of middle ear disease， were used．The right buUa WaS exposed by neck incision and blunt separation and then 30 lxL LPS solution(1mg／m1)Was injected in three groups(36