地衣芽孢杆菌产β甘露聚糖酶发酵和纯化工艺的响应面法优化化学工程专业论文.docxVIP

中文摘要为了对中性8．甘露聚糖酶产生菌一地农芽孢杆菌TJ．101的发酵工艺和纯化 中文摘要 为了对中性8．甘露聚糖酶产生菌一地农芽孢杆菌TJ．101的发酵工艺和纯化 工艺进行优化，本文贯穿运用了响应面(Response Surface Methodology)优化方 法中的因素筛选实验设计法(Plackett．Burman)和中心复合设计法(Central composite design)对自控发酵罐的发酵过程、絮凝纯化条件、双水相分离和膜浓 缩进行了优化实验设计，并采用喷雾干燥手段得到固体酶制剂产品。 本文采用扩试常用的6．6b自控发酵罐进行分批发酵实验，对影响地衣芽孢 杼蓥发酵生产圣一甘露聚糖酶过程中鼹三个重要影响因素：搅拌速度、通气量及发 酵时间进行中心组合设计，并进行响应面分析，得到最优产酶条件：搅拌速度 658．58r／min，发酵时间46．34h，通气量5．0L／min，在此条件下口．甘露聚糖酶的 酶活力达到440U／mL。 以聚铝为助凝剂，采用阴离子聚丙烯酰胺和阳离子聚丙烯酰胺为絮凝剂，对 粗酶液的絮凝分离条件进行了考察，采用Plackett-Burman设计法进行重要因素 的筛选，并对其采用中心组合法设计实验，透过响应蔼优仡褥到加水量 240．55％(v)，阳离子加入量14．13％(V)，阴离子加入量16．97％(V)的最佳絮凝条 件，在此条件下酶活收率达到72．93％。利用喷雾干燥将纯化后的酶液制成固体 酶制剂产品，酶活高达3000U缝。 考察了8．甘露聚糖酶在双水相萃取中的分配行为，并对聚乙二醇(PEG)与 硫酸盐和磷酸盐的不同组合进行了筛选，得至JJPEGl000／(NH4)2S04的最佳组合。 经过对影响蛋白分配效果的三个因素(PEG、(NH4)2S04和NaCl含量)的多目标 响应面优化，可以得到不同级剔的酶蛋白萃取液。 利用中空纤维膜对发酵液进行浓缩处理，考察了操作过程中的进料量，操作 压力和操作时间对膜滤效果的影响，得到理想操作条件：进料量1．3L／h，操作压 力0．04MPa，超滤对闻在20-45分钟之闻进雩亍分段收集，可获得三级浓缩酶液。 关键词： 地农芽孢杆菌，p-甘露聚糖酶，响应谣，Plackett—Burman，CCD， 絮凝，双水捆萃取，中空纤维膜，优化，发酵 ABSTRACTPlackett-Burman ABSTRACT Plackett-Burman design(PB)and Central composite design(CCD)in response surface methodology(RSM)were employed for optimizing fermentation and purification conditions of 13-marmanase production by Bacillus lichenifo掰2吞TJ一101。 Flocculation，aqueous two—phase extraction(ATPE)and membrane separation were used to punfy the rough zymotic fluid and also spray drying method was used tO produce solid 13-mannanase preparation。 A 6．6L auto—control fermenter BIOSTAT was used to study p-mannanase fermenting process from Bacillus licheniformis．Three significant key factors including rotate speed(r／min)，air flow rate(L／rain)and fermenting time鳓were investigated according to CCD。The optimal values of the variables were determined by RSM analysis and were listed as follows：658．58r／min，5．0L／rain and 46．34h， respectively．The optimized 13-mannanase activity of 440U／mL was obtained． With flocculant of cationic polyacrylamide(c—PAM)and anionic polyacrylamide (A—PAM)and aid—flocculant of polyaluminium chlori