左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽的合成及与DNA的相互作用.PDF

Vol.34 高等 学校 化 学 学报 No.9 2013年9月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 2114 ~2119 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 左左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽的合成及与 DNA 的相互作用 1 1 1 1,2 赵东欣 ,孙摇 静 ,朱其丛 ,卢摇 奎 (1. 河南工业大学化学化工学院,郑州450001;2. 河南工程学院材料与化工学院,郑州450007) 摘要摇 采用Fmoc 固相法合成了左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽(L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr),并经RP鄄HPLC分离和纯 1 13 化,通过ESI鄄MS, H NMR和 C NMR表征了其结构. 采用紫外光谱、荧光光谱和琼脂糖凝胶电泳研究了左 旋多巴(L鄄dopa)及L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr与DNA 的相互作用. 结果表明,随着L鄄dopa和L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr浓度 的增加,体系的紫外光谱呈减色效应;根据Stern鄄Volmer方程可知荧光猝灭方式为静态猝灭;琼脂糖凝胶电 泳中,pUC18DNA 的迁移速率变慢. 推测L鄄dopa 和L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr 与 ctDNA 作用模式为嵌入作用. 与 L鄄dopa相比,L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr与DNA 的相互作用更强. 关键词摇 左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽;DNA;相互作用 中图分类号摇 O621.3摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 摇 摇 帕金森症是一种神经退行性疾病, 主要与黑质纹状体内多巴胺的缺失有关. 目前,左旋多巴 (L鄄dopa)作为多巴胺的前药,被广泛应用于缓解帕金森病征. 但L鄄dopa 的水溶性差,化学和酶氧化的 不稳定性及在神经外周的脱羧作用导致口服L鄄dopa只有不到1%能进入中枢神经系统,极大地降低了 多巴的利用率[1~3]. 另外,L鄄dopa 及其代谢物还会引起 DNA 的损伤,从而导致基因突变和细胞死 [4,5] 亡 . 近年来,随着肽转运蛋白研究的增多,将含有氨基酸结构的多巴修饰为肽,以提高其稳定性、 [6,7] 促进药物转运成为多巴药物研究的新方向 . 本文采用Fmoc 固相合成法对L鄄dopa进行了酪氨酰酪 氨酸二肽修饰,合成了L鄄dopa鄄L鄄Tyr鄄L鄄Tyr;并用紫外光谱、荧光光谱和凝胶电泳研究了其与DNA 的相 互作用,期望降低L鄄dopa对DNA 的损伤,从而提高药物的生物利用度. 1摇 实验部分 1.1摇 仪器与试剂 6310 型离子阱液相色谱鄄质谱仪和Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司);Thermo Scien鄄 tific LGJ鄄10冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂);GELDOCEQ紫外鄄可见凝胶成像仪(BIO鄄RAD公司); TU鄄1810 型紫外鄄可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);F23010 荧光分光光度计(美国 Varian公司);DYY鄄6C型电泳仪和DYC鄄310 型电泳槽(北京市六一仪器厂);PHS鄄25B 型数字酸度计 (上海大普仪器有限公司);DPX鄄400 MHz超导核磁共振仪(瑞士Brucker公司),TMS为内标. 左旋多巴(纯度99%,广西昌洲天然产物开发有限公司); Fmoc鄄Tyr(tBu)鄄Wang Resin(0郾39 mmol/ g)、Fmoc鄄Tyr(tBu)鄄OH、1鄄羟基苯并三唑(HOBT)、N,N忆鄄二异丙基乙胺(DIEA)和苯并三氮唑鄄 N,N,N忆,N忆鄄四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)均购自上海吉尔生化有限公司;N,N鄄二甲基甲酰胺(DMF) 和茚三酮(天津市科密欧化学试剂,分析纯);哌啶(分析纯)和