tnfsf4基因在肝细胞肝癌发展及索拉菲尼治疗中的作用外科学普外专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 TNFSF4基因在肝细胞肝癌发展及 索拉菲尼治疗中的作用 浙江大学医学院 外科学(普外) 硕士研究生 金平波 导 师 郑树森院士 中文摘要 背景 肝细胞肝癌的发病率在过去的几十年里逐渐升高，是恶性肿瘤中死亡率位居 第3的肿瘤，即使近年来我们对肝癌的发生发展的认识有了极大的进展，但我们 对晚期肝癌的治疗手段仍极其有限。索拉非尼是一个小分子络氨酸激酶抑制剂， 抑制VEGFR，PDGFR及Raf家族激酶，在临床上应用于晚期肝癌的治疗，有效性 仅在30％左右且多于开始服药后6个月左右产生耐药性，对索拉非尼的抵抗目前 仍需要大量研究。 目的 本研究探讨TNFSF4基因在肝癌细胞中的作用，及其与索拉非尼治疗中的相 互关系探讨其与肝癌治疗的相关性，并分析其在肝细胞肝癌临床样本中癌一癌旁组 织表达的差异，以探讨TNFSF4基因与肝癌发生发展，治疗的相关性及其可能的 分子机制。 方法 1．通过体外转染TNFSF4敲除慢病毒建立TNFSF4基因敲除的肝细胞肝癌细 胞株，分析TNFSF4基因敲除后蛋白质组学的差异，探讨可能的作用。 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 皇!!i堕 ————————————————————————————————————————————————————，————————————————一一一 2．利用建立的细胞株进行细胞增殖，体外侵袭的实验，探讨TNFSF4敲除对 细胞功能上的影响。利用流式细胞仪分析TNFSF4基因敲除后凋亡周期上的变化。 3．加入索拉非尼处理TNFSF4敲除的细胞，探讨TNFSF4在肝癌治疗中发挥 的作用。 4．收集临床肝细胞肝癌样本，利用PCR技术及免疫组化技术在mRNA层面 及蛋白表达层面检测实际临床中癌．癌旁TNFSF4基因表达的差异，探讨TNTSF4 基因与肝癌的治疗预后的差异。 结果 1．TNFSF4基因敲除后细胞JAK．STAT3表达量明显下降，cleaved caspase3明 显上调，p53上调而MDM2下调，TOEIBl／2表达下调，N—Cadherin的表达明显上 调。 2．TNFSF4基因敲除后相比对照组细胞体外侵袭能力及细胞活性明显下降 (P0．001)，加入TNFSF4细胞因子后侵袭能力及细胞活性明显恢复(P0。001)。 3．TNFSF4基因敲除后细胞凋亡明显增多，加入细胞因子能逆转细胞凋亡 (P0．001)。TNFSF4敲除后能增强索拉非尼产生的凋亡，协同效应明显(P0．001)， 并同样在加入TNFSF4后被逆转。 4．肝细胞肝癌临床样本中，肿瘤组织中TNFSF4的mRNA表达量明显低于癌 旁组织(P；0．031)，3对免疫组化样本中均可见到癌旁组织染色高于癌组织，与PCR 结果一致。 结论 首先，TNFSF4基因敲除下调JAK—STAT3通路，能促进p53表达并同时抑制 MDM2表达，cleavedcaspase3及E-Cadherin的含量升高。其次，TNFSF4能敲除 能抑制细胞侵袭，抑制增殖活性，促进凋亡，增强对索拉非尼的敏感性，这些效 应能在加入TNFSF4细胞因子后得以逆转。最后，在肝细胞肝癌临床标本中， TNFSF4在表达谱水平与蛋白水平的癌旁的表达高于在癌中的表达。 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 关键词：TNFSF4基因；肝细胞肝癌；索拉菲尼；耐药；基因敲除；凋亡； 细胞侵袭；，自噬 IV 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 英文摘要 The function of TNFSF4 in the development of hepatocellular carcinoma and the treatment of sorafenib Zhejiang University School of Medicine Postgraduate： PingboJin Supervisor： Prof．Shusen Zheng Abstract Background In recent decades，the prevalence of hepatocellular carcmoma gradually elevates， accounts for over 70％of primary liver cancer,is in the 3rd mortality p