baf57通过wnt信号通路调控肝癌细胞增殖及凋亡外科学专业论文.docxVIP

厅6le 厅6le of Contents Table of Contents Abstract in Chinese ··I Abstract in English ·。III Abbreviation ·-V Partl BAF57 esxpression in HCC and its clinical significance。···········‘1 Materials ··2 Methods 5 Results 12 Conclusion and discussion ·16 Part 2 Tumor promotion role ofBAF57 both in vivo and in vitro’······’18 Materials ·19 Methods ··22 Results 28 Conclusion and discussion ·34 Discussion and conclusion 37 Reference ·38 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 背景和目的 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常见、 高发的恶性肿瘤之一，增长快、高转移性高复发己成为影响HCC预后的最重要 因素。随着技术的发展，研究的深入，很多实验报道肝癌细胞内存在很多的异常 蛋白表达或者基因突变，而这些异常点往往可以作为靶向治疗的目标点。随着基 因靶向治疗的发展，人们发现一部分癌症确实可以得到良好的治疗，生存期明显 延长。我们将继续探所肝癌细胞内存在的可能作为靶向治疗的目标点，同时结合 靶向治疗，以突破目前肝细胞癌治疗的极限。以往研究发现BAF57 (Brg．1．associated factor 57)是哺乳动物染色质重组复合小体SWI／SNF的一部 分。BAF57在前列腺癌、乳腺癌组织中的表达明显增高，其作用主要是促进癌细 胞恶性、增殖及转移。然而BAF57在肝癌细胞中的作用及机制并不清楚。本课 题将通过体内外研究BAF57与肝细胞癌的关系，以及其影响肝癌发生发展的可 能机制，为治疗肝癌靶向点提供新的可能和方向。 试验方法为了了解BAF57与肝细胞癌的关系，本课题研究中我们首先通 过实时荧光定量PCR(qPCR)、免疫组化(IHC)、蛋白质免疫印迹实验(WB) 研究人肝癌组织细胞内BAF57的表达量：然后结合临床标本的病理资料及相关 检查统计分析BAF57与哪些临床指标相关，同时统计其临床预后。在细胞实验 中，我们通过构建敲低BAF57稳转细胞系来观察BAF57对肝癌细胞恶性及功能 的影响，同时利用蛋白质免疫印迹实验(、ⅣB)研究敲低BAF57影响哪些信号通 路。体内实验中我们将构建好的敲低BAF57稳转细胞系，经过扩增，打入裸鼠 右后背，并记录肿瘤生长趋势，7周后处死小鼠，观察敲低BAF57对肿瘤生长 及转移的影响。 研究结果及结论首先在5 l例临床标本人肝癌组织中BAF57的mRNA表 达水平发现BAF57在肝癌内表达的增高，结合临床及病理资料统计发现BAF57 与肿瘤大小、预后密切相关。免疫组化(IHC)、蛋白质免疫印迹实验(WB) 实验中同样证实BAF57在肝癌内表达的明显增高。细胞功能实验中，在肝癌细 胞系SMMC．7721敲低BAF57发现能显著抑制了细胞的增殖并促进凋亡，但不 能明显抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。对分子机制的研究发现，敲低BAF57能够 T 万方数据 摘要直接增强GSK表达水平从而下调了IB-Catenin的表达，提示可能通过 摘要 直接增强GSK表达水平从而下调了IB-Catenin的表达，提示可能通过 Wnt／13．catenin下游途径影响细胞增殖和凋亡。裸鼠皮下成瘤实验也进一步证实敲 低BAF57能够抑制肝癌的生长，但不影响肝癌转移。我们的实验结果揭示BAF57 在肝癌中表达增高及其可能调控肝癌增殖、凋亡的功能，提示BAF57可能作为 一个潜在的肝癌治疗靶点。 关键词：肝细胞癌；BAF57；GSK；fl-Catenin；增殖；凋亡 II 万方数据 AbstractBacI‘ground Abstract BacI‘ground and objective Hepatocellular carcinoma(HCC)is ofthe most common锄d the highest incidence of malignant tumors in the world．The fast gr0、Ⅳth and high mctastatic recurrence has become the most important factors of influencing the prognosis oflice．With the development