低氧模拟物cocl2对人急性髓系白血病细胞hl60中ros及钙离子的调控及其意义生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

北京协和医学院 北京协和医学院 中国医学科学院 硕十研究生学位论文 摘 要 目的：近几年来，诱导急性髓系白血病细胞分化和凋亡已成为治疗白血 病采取的有效途径，丽白血病细胞内固有的ROS水平及钙离子浓度震荡在白 血病细胞的增值、分化、凋亡过程中起着不可忽视的作用。研究低氧环境对 急性髓系白血病细胞内ROS及钙离子水平的调控将对进一步探讨白血病发病 机制及治疗策略提供理论依据。 方法：采用四唑盐(MTT)比色法在体外评价CoCl2模拟低氧环境后对 两种人急性髓系白血病细胞、一种人急性淋巴系白血病细胞和一种人慢性髓 系白血病细胞的毒性；利用RIT．PCR、WeStem blot法检测HIF．1a在mI斟A 和蛋白水平的表达；利用流式细胞仪(FACS)检测低氧条件下细胞内活性氧 (Reactive oxygen species，ROS)水平的改变，并用荧光共聚焦显微镜观察随着 缺氧时间和程度的加深，白血病细胞内钙离子含量的变化情况。 结果：(1)CoCl2模拟体内低氧环境后，对人急性髓系、急性淋巴系白血 病细胞均有明显的杀伤作用，IC50值从71．35“M到160．25“M不等；人慢性髓 系白血病细胞K562对低氧环境则不敏感，IC50为374．26“M；(2)随CoCl2 作用时间延长和浓度升高，HIF．1Q在mRNA和蛋白水平的表达量均增加，缺 氧2小时mF．1 0【蛋白表达即显著提高：(3)150pM CoCl2作用于白血病细胞 HL60 2小时后即可诱导细胞内ROS水平上升，6小时后ROS含量明显高于 对照组，8小时即可检测到RoS作用高峰，10小时后细胞内RoS基本降至 与对照组相当或略高于对照组的水平；(4)激光共聚焦显微镜观察结果显示， 经150“M CoCl2处理能使HL60细胞内游离钙离子浓度逐渐增加，并于8小 时达到高峰，之后开始恢复至原水平，而低于IC20的CoCl2处理组则对胞内 钙离子浓度基本没有影响。 结论：不同白血病细胞对低氧环境表现出不同的敏感度，这可能与白血 病细胞生长的骨髓微环境和分化程度密切相关。用150“M CoCl2处理细胞后， HIF．1a、RoS及钙离子水平均在细胞受刺激后2小时开始快速上升，并且I的S 和钙离子浓度有着十分相似的变化趋势，在8小时内与低氧程度呈正比关系， 北京协和医学院 北京协和医学院 中国医学科学院 硕士研究生学位论文 提示我们三者作为生命体应激状态下的重要信号转导分子，它们相关的信号 传导网络既相互关联又相互制约，在细胞应激初期共同整合外界刺激信号， 调节细胞的生命活动。 关键词：低氧模拟物，HIF．1a，ROS，Ca2+ 4 北京协和医学院 北京协和医学院 中固医学科学院 硕?1：研究生学位论文 ABSTRACT Objective： To induce differentiation a11d印optosis of acute myeloid leukemic cells in treatment of leukemia Ims been an e丘IectiVe method recent years． Illllerent cellular ROS aIld Ca2十level of leul(emia cells play a very impon习mt r01e iIlⅡ1e prolif．eration，differentiation aIld apoptosis．Our research focuS on nle regulation of ROS and Ca2+under a hypoxia condition、vhich may explain tlle mech刎sms of leukemia仔om an aspeCt of microenvimmem． Methods： MTT aSsay was used to eValuate the cytotoxicit)， of h)，poxia-mimicbng agems CoCl2 on咖h啪aIl acute myeloid leul(emic cell lines，one h啪an acute lymphoblaStic Ieul(emia ceU line and one hum觚chronic 脚yeloid leukemia；RT—PCR Westem blot were used t0 obServe the expression of HIF．1a．The level of ROS、Ca2+under a hypoxia condition were deteCted by FACS aIld LaSer Scanning Confoc础Microscope Result