肺炎克雷伯菌医院血流感染暴发的分子流行病学研究临床医学内科学传染病专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 医院感染暴发即在医疗机构或其科室中，短时间内发生3例以上同种同源 医院感染事件的现象。医院感染暴发，病死率高，易引起公众的普遍关注。为 了有效地控制感染的流行，必须迅速查明感染源，目前公认的查找感染源的方 法是分离病原菌并对其同源性进行分析。本研究选取一起近期医院血流感染暴 发事件分离的肺炎克雷伯菌株，应用抗生素药敏试验，脉冲场凝胶电泳和多位 点序列分析的方法对病原体进行同源性分型，为及时有效的控制感染的流行提 供依据。 方法 1、菌株来源和药敏试验：试验菌株分离白天津市某医院外科病房2010年7 月16日至7月28日5名医院血流感染患者的8株肺炎克雷伯菌临床株(Kpl- Kp8)；对照菌株分离自同期天津市另一家医院感染科病房的6株肺炎克雷伯菌 临床株(Kp9．Kpl 3)。采用琼脂纸片扩散法(K—B法)和微量肉汤稀释法(MICs)检 测肺炎克雷伯菌临床株对1 1种常用抗菌药物(氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、 头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松、阿莫西林／克拉维酸、美罗培能、哌拉西林、 复方磺胺甲恶唑、氨曲南)的耐药性。 2、脉冲场凝胶电泳(PFGE)：提取肺炎克雷伯菌全基因组DNA，经限制 性内切酶Xbal酶解后进行肺炎克雷伯菌全基因组DNA的脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分析。 3、多位点序列分析(MLST)：从试验株中选取菌株l印1及另2株Kp4，Kp5； 从对照株中选取2株Kp9和K13，共5株肺炎克雷伯菌临床株，分别扩增其7 个管家基因(rpoB,gapA，mdh,pgi,phoE,infB，tonB)的核心片段(318bp-501bp)，并 进行序列分析，将测序结果提交国际数据库网站http：／／www．mlst．net，获得菌株 的ST型。 争士田：口木 1、药敏试验：8株试验菌株对1 1种抗菌药物的药敏结果显示：菌株Kpl对 氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、阿莫西林／克拉维酸耐药，对美罗培能、哌拉 天津医科大学硕士学位论文西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松敏感；菌株 天津医科大学硕士学位论文 西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松敏感；菌株 Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌临床株的抗生素药敏谱完全相同，且均为多重耐 药菌，即对氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松 耐药，对阿莫西林／克拉维酸、美罗培能、哌拉西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南 敏感。6株对照菌株中：菌株Kpl4对11种抗菌药物均敏感；菌株Kp9和Kpl2 对哌拉西林、氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲 松、阿莫西林／克拉维酸耐药，对美罗培能、复方磺胺甲恶唑、氨曲南敏感；其 它3株菌的药敏谱不尽相同。 2、PFGE结果：8株试验菌株中，共分出2型，菌株Kp2一Kp8共7株肺炎克 雷伯菌临床株的PFGE谱型一致，即均具有1 l条电泳条带，且相应条带大小相 同，为PFGE II型；菌株Kpl具有12条电泳条带，与I@2等其它7株有7条条 带以上的差异，为PFGE I型。6株对照菌株共分出6型，其电泳条带数9．12条 不等，均具有7条以上条带的差异。 3、MLST的结果： 3株试验菌株中，菌株Kp4，Kp5具有一致的MLST型，即 STl33(12，1，1，2，5，1，36)，与菌株Kpl(10，l，1，1，9，4，12)有5个基因座不同，为 不相关菌株。2株对照菌株中，菌株Kpl3的ST型为ST86(9，4，2，1，l，1，27)， 与菌株Kp (1，，，，1，1， 具有6个基因座的不同，为不相关菌株。这一研究 结果与 ．9的研1究1结1果一36致)PFGE 。菌株Kpl与菌株Kp9均在MLST数据库中未查询 到相应的ST型。菌株Kpl的ST型与ST23，ST548，ST793，ST808最为接近， 菌株Kp9的ST型与STl5，STl32，ST326，ST655，ST709，ST748最为接近。 结论 1、经抗生素药敏试验、脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析的分型研究，可 以判定天津市某医院外科病房2010年7月16日至7月28日手术后发生的5例 血流感染患者为肺炎克雷伯菌医院血流感染暴发。分离白患者A的痰和血液中 的肺炎克雷伯菌(Kp2，Kp3，Kp6)与分离自患者B(Kp4)，C(Kp5)，D(Kp7)，E(Kp8)4 名患者血液中的肺炎克雷伯菌为同一克隆株，根据5名患者感染的先后顺序， 可能患者A为此次医院感染暴发的感染源，通过交互感染传给B，C，D，E四名患 者。分离自患者A腹腔引流