产气荚膜梭菌netb毒素阻断elisa方法的建立与应用疾病诊断专业论文.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：no NO．：130620522 Dissertation for the Professional Master Degree Establishment and Application of Clostridium Perfringens NetB Toxin Blocking ELISA Candidate：Nie Sij ing ^ bulaervlsor：L1 Liuangxlng 3Un t_iang 一 一 一 Degree Category：Master of Veterinary College：College of Veterinary Medicine Research Field：Disease Diagnosis Study Mode：Full—time Harbin China June 2015 万方数据 目录 目录 ㈣Y2771㈣780 目 录 摘要 I 英文摘要 一ⅡI 1前言 ．1 1．1不同类型产气荚膜梭菌研究进展 1 1．1．1 A型产气荚膜梭菌 1 1．1．2 B、C、D型产气荚膜梭菌 ．．2 1．1．3 E型产气荚膜梭菌 2 1．2鸡坏死性肠炎概述 j ．．2 1．2．1 Q毒素与坏死性肠炎 3 1．2．2 NetB毒素与坏死性肠炎 一3 1．2．3鸡坏死性肠炎流行病学 ．．3 1．2．4鸡坏死性肠炎发病诱因 ．．4 1．2．5鸡坏死性肠炎临床症状和病理变化 ．．4 1．2．6鸡坏死性肠炎的防治 一5 1．3产气荚膜梭菌的诊断技术 5 1．3．1病原学诊断方法 ～5 1．3．2分子生物学诊断方法 ．．5 1．3．3血清学诊断方法 。6 1．4研究目的和意义 7 2材料与方法 8 2．1试验材料 8 2．1．1试验动物和细胞 8 2．1．2菌株、质粒及血清 ．．8 2．1．3主要分子生物学试剂 。8 2．1．4主要试剂的配制 一8 2．1．5仪器设备 11 2．2试验方法 ．11 2．2．1抗原制备 11 2．2．2多克隆抗体制备和生物活性鉴定 14 2．2．3单克隆抗体腹水制各和生物学活性鉴定 15 2．2．4阻断ELISA方法的建立 16 2．2．5阻断ELISA方法的特异性试验 1 8 2．2．6阻断ELISA方法的灵敏度试验 19 2．2．7阻断ELISA方法的重复性试验 19 2．2．8重组NetB蛋白免疫鸡血清抗体效价动态变化检测 。19 2．2．9阻断ELISA方法对临床样品的检测 19 2．2．10数据统计 20 3结果 ．．21 3．1重组NetB蛋白的诱导表达 21 3．2多克隆抗体的制备及鉴定 ．22 I 万方数据 曼曼曼曼!曼寰曼蔓曼曼皇曼曼!!曼曼皇曼曼皇曼葛皇詈詈曼曼曼曼皇皇舅鲁量|11 曼曼曼曼!曼寰曼蔓曼曼皇曼曼!!曼曼皇曼曼皇曼葛皇詈詈曼曼曼曼皇皇舅鲁量|11 一一I舅舅曹目罾晕曼曼曼皇 东北农业大学兽医硕士学位论文 3．2．1 NetB多克隆抗血清的效价测定 22 3．2|2多克隆抗体的Westernblot检测 一23 3．3单克隆抗体腹水的制备和生物学活性鉴定 ．23 3．3．1腹水的纯化 23 3-3．2单克隆抗体浓度和效价的测定 23 3．4阻断ELISA方法的建立与应用 25 3．4．1阻断ELISA方法的优化 25 3．4．2阻断ELISA方法的临界值的确定 3 1 3．4．3阻断ELISA方法的灵敏性的试验 31 3．4．4阻断ELISA方法的特异性试验 3 l 3．4．5阻断ELISA方法的重复性试验 32 3．4．6重组NetB蛋白免疫鸡血清抗体效价动态变化检测 一32 3．4．7阻断ELISA方法对临床样品的检测 33 4讨论 ．35 4．1腹水的制备与纯化 ．35 4．2阻断ELISA方法的建立 35 4．3阻断ELISA方法条件的优化 35 4．4阻断ELISA方法特异性试验 36 4．5阻断ELISA方法的应用 ．36 5结论 ．38 致{射 一 ．．39 参考文献 一40 攻读硕士学位期间发表的学术论文 ．．46 万方数据 CoNTENTSCoNTENTS CoNTENTS CoNTENTS Abstractin Chinese ． ．．． ． ．． ．． ．．．．．． 1 Abstract in English．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．