滇黑两省南瓜病毒病病原鉴定及其外壳蛋白基因克隆作物遗传育种专业论文.docxVIP

滴 滴 要 蒜髭选和嚣瘪鹾省分羽是我鲎正擘和反攀节南瓜生产盼大誊，近年来黢蘑栽培蜀积 豹不断扩大，瘸毒瘸害也野益加璧．弓l起严霞的产蕊和旗量授失。本辑览通过从云南、 黑兜溉两省采集璃蕊病样，确定弓l熬两省南瓜病毒瘸害豹主要病毒病簿，玲离克隆主甏 瘸毒瘸原瓣井壳萤出基因，并对鞭省鲍部分南瓜材料避行了抗主要瘸簿瘸愿的初步筛选， 为南瓜静抗瘸簿努种靼病毒瘸瓣霄效防拄奠定基础， 本顼研究袋寨了摩展藕毒瘸样菇t91份，其孛黑龙江省149傍，云南省42份，采样 涉及了两省南噩生产抟主簦送域。应鹰电予照搬镱负染法和越鞲讶冀法蕊察瘸原粮体形 悫及缩施病理学特征；举J用酶联免疫吸辩测定(ELISA)法中的双抗体夹心ELISA (DAS-EILSA)、嬲接ELlSA(I-ELISA)、兰抗体夹心ELISA(TAS．ELISA)双及凝转 最聚合酶链式反应(RT-PCR)、受接捕捉PCR(IC-PCR)方法箍定了采集样品中的瘸毒种 类：对被确定为南瓜主要瘸毒瘸原熬雏壳虽盎(CP)基因避彳子了PCR扩增，克隆到 pGEM-T载体井进行瓣净；斑用摩擦接种法和浸根接种法对嚣南、鬈龙江省郝分鹰瓜晶 晨、晶种进行了抗性筛选。 ，姘究结果裹甥，云鬻雀瘫墨筑霉种类鸯案朱瓜环斑癌毒蔼豫抹系(PRSV，w)、黄最 花廿辅毒(CMV)、小两葫芦黄诧许病毒(ZYMV)、耪虱传双生病毒(WTG)，鲤种病 毒瘸原所占比倒势剃为52．4％、38．1％、11．蝴、2，4％+黑龙江省病毒种类有CMV、西 蕊藏砷病毒(WMV)，其掰蛊毙铡为24．2％、17．5％。舅扑两省貔瘸毒样晶在电镜下蜘 观察到了鹾照豹番薪斑萎躺霉属(Tospovirus)病毒。初步确定嚣南省南瓜主簧病毒瘸琢 为PRSV-W和CM、‘黑龙进省南瓜主要瘸霉瘸原为CMV、WMV，自然条摊下还常常发 生复食橙染。 对PRSV—W、WMV授染的南瓜瘸叶豹细臆病理学蕊察结聚表明，在感瘸细胞中有 大量的蘸轮状、片蔼状耩象带状内禽体，线状病毒裢体星幕状或敷带在缨鼹质率，其有 典型辩马铃着Y病毒属(Po妒irus)侵染寄主弓|越的细胞瘸理特征。在CMV侵染静离 ，纲臆孛，病毒粒体在细胞威中累黎予议球形的膜内。对南瓶瘸毒瘸的细臆瘸理研究羼 内醢束见同类掇道。 对PRSV-W云南南最点个分离物、WMV罴龙江南瓜势离物、CMV云南、髌龙江 南越分离物的外囊媛岛蒸雕进行了序列分析。结栗袭臻，PRSV蒙自分离秘(PRSV+MZ) 霸鞲嚣分离韵(PRSV-SP)cP蓦弱竣苷歉夸剜垒长873bp,犏玛291个氮基酸，PRSV蛾 由分离物(PRSV-ES)、版纳分离街(PRSV。BN)秘寅川分离物(PRSV．Bc)全长867翰， 编码289个氮基酸*PRSV蒙鑫分离褥和露霹分离勰髂弼源性鼹离，_=者的梭营酸和氮 蒸簸亭剜爵踩豫分剃逸辩98．7％和鹳．9％，酶甥使意分析和序捌分析结粜一致。对PRSV 云南南嫩五个分离物和照外17个PRSV努离物、2个匿内PRSV分离物的岸剃比较韧步 袭孵，PRSVcP萋魏的序列在番本雁环斑瘸毒翅‘f蕊椿系(PRSV-W)和藉术噩环斑痔毒 替本难株蒹(PRSV-P)两个株系中蒜裂不是报丈，和她避位置有一定静关系。WMV罴 龙江鸯瓜分离物(WMV-HIA)cP基霹全长852 bp编码284个氮纂酸，序列分析和酶 切位点分析都表瞎，WMV髹龙扛鸯瓜分离物和由西分离扬弱潦性商予秘郑州分离物的 切位点分析都表瞎，WMV髹龙扛鸯瓜分离物和由西分离扬弱潦性商予秘郑州分离物的 河滚性。CMV云南南瓜分离物(CMV-、rN)靴黑忿江南瓜分离物(CMV．Hu)CP基鳗 垒长均657砩，编谒219个氨基酸。两个分离钠的核嚣皴鞫氨基酸简潦性分嬲迭爨96．8．0／, 和97．4％，和营内井CMV驻组l、豫缝珏的不辩分离秘翘馥较袭甥这两个分离物和鞭 缱1分离物的拔替酸嗣源性农89％以上，氮萋数翔源性在93％班上，和亚组弧凳离物艚 梭苷酸弱潦性在69％以下，戴萋酸序鳓同源控嶷74％戡下，确定CMq嚣南、蒜巍江秘 个南瓜分离物属予驻缓l。 对云南雀的I l傍南瓜材料进行了抗PRSV．W、CMV豹筛选、对熏龙江省的20份材 料进行了抗CMV、WMV的簿选，结果表明云南省的11掰材糕申对PRSV—W表现为抗 瘸的l份、中抗的5份、感病豹1静、熹撼豹4份。对CMV强有1傍表现为中抗，6 傍表现为感病，4份表现为商感。翼龙江省的20份材料中只有2份对WMV表现为串抗， 其采袭现为幂弱罄艘的感瘸，对CMV表现为高抗辩寄2鼢、抗璃豹3份、中抗的7份、 感瘸豹7份、高感冉。1份。 本研究逶过系统鉴定翘步髓确了云蘸、浆抛江两雀南蕊鳇主要筑毒缡辣，首次对 PRSV五个嚣摩分离物、WMV黑就江分离物和CMV黧建江、云南分离躲避符了CP基 因的扩埔、壳隆和