毛细管电泳技术及其在植物学研究中的应用.doc

Beckman Coulter, Inc., Mailing Address: Telephone: (86 21) 3865-1000 Shanghai Rep Office Room 1201, UC Tower Facsimile: (86 21) 6875-1087 P.R. China 500 Fushan Road, Shanghai 200122 Internet: 毛细管电泳技术在植物学研究中的应用 一、毛细管电泳在植物学研究领域中的应用 毛细管电泳在经过二十多载的发展和完善之后，目前已成为一种主流的分析技术手段，而被广泛地应用于研究、方法开发以及质量控制实验室而有其特定的位置，并且在不断加速地得予应用。毛细管电泳技术正在向着替代许多传统平板凝胶电泳技术、薄层层析技术、高效液相色谱技术等方向前进。据不完全统计，国际上已有近万台的毛细管电泳仪在各种实验室中运行着。目前，毛细管电泳技术已常规地应用于核酸、蛋白质、药物、糖类以及各种其它小分子、离子等的日常分析，尤其在碱性药物分析、手性分子拆分等更有其独特的应用。毛细管电泳技术与其它技术如激光诱导荧光检测技术、免疫分析技术、多级串联质谱、电化学检测技术等的联用也日趋活跃。食品的组成成分复杂,所以无论用GC 还是用HPLC 分析时,都要求对样品进行复杂的前处理,以免造成污染。高效毛细管电泳克服了HPLC 试验成本高,GC 应用面窄,TPLC 柱效低,重现性差,时间长的缺点。毛细管电泳在植物学研究中常见组分如无机离子、有机酸、碳水化合物、蛋白质、游离脂肪酸,以及食品添加剂与农药残留等方面有着广泛的应用。高效毛细管电泳以其样品处理简单、多组分可同时测定、快速、自动化及越来越低的检出限,被广泛应用在农业分析检测中。 在植物学研究中，被分析物通常是植物提取物等等，这些样品的组成成分复杂,所以无论用GC 还是用HPLC 分析时,都要求对样品进行复杂的前处理,以免造成污染。高效毛细管电泳克服了HPLC 试验成本高,GC 应用面窄,TPLC 柱效低,重现性差,时间长的缺点。毛细管电泳在食品成分如无机粒子、有机酸、碳水化合物、蛋白质、游离脂肪酸,以及食品添加剂与农药残留等方面有着广泛的应用。高效毛细管电泳以其样品处理简单、多组分可同时测定、快速、自动化及越来越低的检出限,被广泛应用在食品添加剂检测中。在1997 年的第48 届分析化学与应用光谱学会议上,HPCE 被列为食品分析、饮食安全检查等方面重点发展内容之一。 与通常的分析手段相比，毛细管电泳方法有以下的一些优势： ①清洗速度快，只要在测定样品间将毛细管充分冲洗,便可避免样品间的交叉干扰; ②较低的检出限完全满足国标的要求; ③由于HPLC 无法分析酸性防腐剂,所以不得不采用传统的滴定法,该法操作比较繁琐,而且误差很大,HPCE 成功地实现了对该类物质的分离测定,最低检出限可达5 mg/ kg ,在国标中该类物质限量范围是50～450 mg/ kg ; ④HPCE 可用于毫无相关的混合添加剂的分离分析; ⑤HPCE 的一个显著特点是分析速度快，一般在几分钟内就可以完成分析。⑥样品的前处理要求很低，有些样品可以不需要前处理就可以进样分析。 各种农产品中蛋白质/多肽/氨基酸的分析 蛋白质是食品的一个重要组成部分，通过对蛋白质的测定，不仅可以从营养方面评价食品的价值，还可以研究食品在加工过程中的变化，或作为鉴定食品的依据。毛细管电泳技术比其他色谱技术更适合蛋白质分析，因为它有着非凡的分离效率和很低的分析成本。毛细管电泳应用于食品中蛋白质的分析已经有很多文献报道，Luguera采用毛细管凝胶电泳测定了葡萄酒在生产过程中蛋白质的变化，用以研究提高葡萄酒的质量；Recio用毛细管电泳研究了牛奶在高温处理过程中蛋白质的变化状况及耐热蛋白酶所产生的多肽；Kanning用毛细管电泳研究了母乳、牛乳、山羊乳中蛋白和多肽的构成，发现根据电泳图的特征可以判断乳的种类和是否掺假；也有文献报道用毛细管电泳分析谷物中的高分子量麦谷蛋白。氨基酸也是很多食品的营养成分，毛细管电泳可以同时对常见的20中氨基酸进行分析。 糖类及其缀合物的分析 天然产物中的糖种类繁多、结构复杂，常与蛋白、脂肪形成复合物。近年来，随着毛细管电泳技术的不断发展，各种新的糖衍生化反应和检测技术的发现，毛细管电泳已成为分析单糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等糖类化合物的有力武器。单糖的pKa值一般大于11，故需选用强碱性的缓冲液(pH11)，使糖基上的羟基去质子而带负电荷，直接进行电泳分离，用紫外(195 nm)检测．也可以选用硼酸盐缓冲液，硼酸盐与糖基络合形成带负电荷的络合物以进行电泳分离，用紫外检测．简单单糖的分析方法也适于简单寡糖的分析．多糖一般利用酸解或酶解的方法将其转化为寡糖后进行分析