朗伯比尔定律.ppt

* 3. 标准曲线(工作曲线)的绘制 用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，在选定波长下，测定各溶液的吸光度。在坐标纸上，以铁含量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 光度计中,透射比的标尺刻度均匀。吸光度标 尺刻度不均匀。对于同一仪器,读数的波动对透射 比为一定值;而对吸光度读数波动则不再为定值。 吸光度越大,读数波动所引起的吸光度误差也越大 * 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。 100 80 60 40 20 0 T% ?c1 ?c2 ?c3 ?T ?T ?T-透光率读数误差 c ?c1 c1 ?c2 c2 ?c3 c3 * 透射比很小或很大时，浓度测量误差都较大，即光度测量最好选吸光度读数在刻度尺的中间而不落两端。 待测溶液的透射比T在15%~65%之间，或使吸光度A在0.2~0.8之间，才能保证测量的相对误差较小。 * 仪器测量误差 * 仪器测量误差 * 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.434 实际工作中，应控制T在15～65％, A在0.2～0.8之间 * 10.6 光度分析法的应用和其它吸光光度法 一、 单一组分测定 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2) 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量. H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷钼黄(?小) 磷钼(V)蓝(?大) Sn2+ * 二、多组分的测定 在?1处测组分x, 在?2处测组分y b) 在?1处测组分x; 在?2处测总吸收,扣除x吸收,可求y * 二、多组分的测定 ?xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y标液在?1, ?2处分别测得 c) x,y组分不能直接测定 A1=exl1bcx+ eyl1bcy (在?1处测得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy (在?2处测得A2) * 三、 示差吸光光度法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液 ΔA=Ax -As =εb(cx - cs ）=εbΔc * 三、 示差吸光光度法 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx) Ax= εb cx， As = εb cs ΔＡ=Ａx -Ａs =εb(cx - cs ）=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc * 示差法标尺扩展原理： 普通法： cs的T=10%；cx的T=5% 示差法： cs 做参比， 调T=100% 则： cx的T=50% ；标尺扩展10倍 * 四、 双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 * 双波长分光光度法 ΔA ＝Aλ2 －Aλ1 ＝ (ελ2 －ελ1)b c 两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度c成正比。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。 测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合 * 基本要求： ⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。 ⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度，即： ΔAy = ΔA yλ2 － ΔA yλ1 = 0 故：ΔAx+y = ΔA x=(εxλ2－εxλ1)bcx 此时：测得的吸光度差ΔA只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。 * 双波长分光光度法消除干扰 在?2， A?2 = Ax2+Ay2 在?1， A?1= Ax1+Ay1 ?A= A?2 - A?1 = Ax2+Ay2 –(Ax1+Ay1) = Ax2 –Ax1 = ?Ax Ay2 ＝ Ay1 ?Ax =(?