临床基因扩增检验的质量保证..pptVIP

Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法 Westgard多规则质控方法即是将前述的多个质控规则同时应用进行质控判断的方法。最初常用的有六个质控规则，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S规则作为告警规则，当出现质控测定值违反12S规则时，则起动其它规则进行判断。只有当使用所有质控规则判断确定某测定批在控时才说明该测定批在控，只要上述质控规则之一判断测定批失控则即认为该测定批失控。通常上述规则中，13S和R4S规则反映的是随机误差，而22S、41S和10X反映的是系统误差，系统误差超出一定的程度，也可从13S和R4S规则反映出来。 Westgard多规则质控方法的特点 其是在Levey-Jennings质控图方法的基础上产生的，自然也就具有Levey-Jennings质控图方法的优点，可通过相似的质控图来进行分析； 假失控和假告警概率低； 误差检出能力增强 。 累积和 (CUSUM) 质控方法 累积和 (CUSUM) 质控方法于1977年由Westgard等提出,对系统误差有较好的测出能力。 常用的累积和 (CUSUM) 质控规则 质控规则 起动累积和计算的阈值（k） 质控限（h） ±1.0s ±2.7s ±1.0s ±3.0s ±0.5s ±5.1s 累积和 (CUSUM) 质控具体步骤 与上述其它质控方法一样,首先得到测定均值和标准差(s) ; 确定起动累积和计算的阈值（k）和质控限（h）; 确定质控规则; 绘制质控图; 累积和(CUSUM)计算; 如有失控，则采取措施予以纠正，再开始上述累积和计算。 累积和 (CUSUM) 质控图 “即刻法”质控方法 “即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,即Crubs异常值取舍法 ； 只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。 “即刻法”质控方法具体步骤 将连续的质控测定值按从小到大排列，即x1、x2、x3、x4、x5、x6、……xn（x1为最小值，xn为最大值）； 计算均值()和标准差(s); 按下述公式计算SI上限和SI下限值； SI上限=（x最大值－ 均值）/s SI下限=（均值－ x最大值 ）/s 将SI上限和SI下限值与SI值表中的数值比较。 质控结果的判断 SI上限和SI下限值均表7中n2s对应的值时，说明测定质控测定值的变化在2s之内，是可以接受的。 如SI上限和SI下限值中之一处于n2s 和n3s对应的值之间时，说明该质控测定值的变化在2s～3s之间，处于“告警”状态。 当SI上限和SI下限值之一 n3s对应的值时，说明该质控测定值的变化已超出3s，属“失控”。 室内质控数据的评价 IQC为一集体活动，除实际测定者外，还应有另外一人对测定数据进行质检。 不能将IQC作为一个监察方法，当发现一次测定未达到质量标准时，应以建设性的而非批评的方式去探查失控的原因。 除了将IQC数据作为日常质控外，还应定期评价累积数据以监测在测定操作中的长期变化趋势。 评价应定期进行。 弱阳性质控样本常见的失控原因 核酸提取中的随机误差。如核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。 仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。 试剂的问题。如Taq酶和/或逆转录酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。 阴性质控样本的失控原因 主要为扩增产物的“污染”和/或临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉 “污染”. 室内质控的局限性 IQC可确保每次测定与确定的质量标准一致，但不能保证在单个的测定样本中不出现误差。比如样本鉴别错误、样本吸取错误、结果记录错误等。此类误差的发生率在不同的实验室有所不同，一般要求小于0.1%，且应均匀地分布于测定前、测定中和测定后的不同阶段。 影响临床基因扩增检验结果的最关键因素 产物“污染”（Carry-over) 测定人员的操作：标本混淆；贴错标签、核酸提取等 试剂 避免基因扩增检验假阳性结果的措施 严格的实验室分区； 使用带“滤心”的吸头； 设立“阴性”质控（与标本同时处理）； 使用防“污染”（含UNG）的PCR试剂； 临床“假阳性”问题：病原微生物如结核杆菌经药物治疗后已死亡，但PCR仍可为阳性，故治疗结束后至少两周内不宜做PCR检测。 避免基因扩增检验假阴性结果的措施 避免由于来自于标本的血红蛋白、肝素、某些激素