芳香化酶及其抑制剂对赤点石斑鱼性逆转的作用生理学专业论文.docxVIP

论文题目：芳香化酶及其抑制剂对赤点石斑鱼性逆转的作用专业：生理学 论文题目：芳香化酶及其抑制剂对赤点石斑鱼性逆转的作用 专业：生理学 博上生：李广丽 导师：林浩然院士 摘要 利用GeneRacerTM技术，以雌雄同体、雌性先熟的赤点石斑鱼脑垂体为模板， 克隆了赤点石斑鱼芳香化酶基因P450aromB(脑犁)和P450aromA(性腺犁)cDNA 全长，应用RT-PCR方法检测了这两种芳香化酶在不同组织中的表达：建立了芳 香化酶活性的直接测定方法；对自然状态下雌、雄鱼血清中性类固醇激素(1l一 酮基睾酮，1 l—KT；睾酮，T：雌二醇，E2)、脑和性腺中芳香化酶活性及其表达 的季节性变化进行检测：对3龄雌性赤点石斑鱼进行电子标记，检测自然性逆转 的鱼类血清中性类固醇激素的变化：用芳香化酶抑制剂Fadrozole和Letrozole、 可芳香化和不可芳香化的雄激素17et—MT和MDHT对赤点石斑鱼进行性逆转诱 导实验；并研究了离体条件下芳香化酶抑制剂对激素分泌的影响。主要研究结果 如下： 1． 赤点石斑鱼性腺发育、性类固醇激素、芳香化酶活性及P450arom mRNA 表达的季节性变化 雌鱼血清中E2和T在卵黄生成期达高峰，雄鱼血清中ll—KT、T和E2在精 子生成期达到高峰；雌鱼l 1-KT浓度非常低(月平均值：O．32_-+0．03 ng／m1)，且在 整个生殖周期中未出现明显波动；繁殖季节．雌鱼血清中E2(最高值为51．68±8．12 pg／m1)明显高于雄鱼(最高值为27．69±9．97 pg／m1)，但雄鱼血清中11-KT(最高 值为6．23_-±-0．99 ng／m1)以及T水平(个别月份除外，最高值为1．64_+0．19 negml) 明显高于雌鱼(最高值分别为0．55_-山．08 ng／ml和O．92±0．35 ng／m1)。此外，雄鱼 血清中11-KT和T在12月份又出现小高峰。 脑和性腺芳香化酶活性也出现明显的生殖周期变化，雌鱼的前脑、中脑和后 脑各部分芳香化酶活性在繁殖季节最高，且显著高于雄鱼；卵巢中芳香化酶活性 脑各部分芳香化酶活性在繁殖季节最高，且显著高于雄鱼；卵巢中芳香化酶活性 在繁殖季节最高，但精巢中芳香化酶活性在繁殖季节最低。性腺中P450aromA mRNA表达的季节性变化与性腺中芳香化酶活性的季节性变化桐与．对应，而脑 垂体中P450aromB mRNA表达的季节性差异，与脑芳香化酶活性的季节性变化 没有对应关系。 结果表明，赤点石斑鱼血清中性类固醇激素与芳香化酶活性变化、生殖周期 以及性别逆转密切相关，性类固醇激素的浓度受到脑和性腺芳香化酶活性的调 控。 2．自然性逆转的赤点石斑鱼血清中性类固醇激素的周年变化 自然性逆转的赤点石斑鱼血清中主要性类固醇激素的变化趋势与雄鱼相似。 血清中1l_KT、T和E2在精子生成期达到高峰(最高值分别为5．92-+1．21 ng／m． 1．63_-+0．39ng／ml和19．98-+5．20pg／m1)，而且血清中11-KT和T在12月份出现第 ：个高峰。此外，从12月份至次年4月份，自然性逆转鱼类血清中11-KT水平 明显高于雌鱼。 结果显示，赤点石斑鱼性逆转并非严格限定在排卵后阶段，性逆转高峰期可 能主要发生在12月至3月期间。 3．赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA的克隆及其表达的组织特异性 赤点石斑鱼两种芳香化酶分别由不同的基因编码。脑芳香化酶(P450aromB) 的cDNA全长为1901 bp，编码509氨基酸；性腺芳香化酶(P450aromA)的cDNA 伞长为1833 bp，编码518氨基酸。序列分析结果表明，赤点石斑鱼两种芳香化 酶cDNA序列的同源性为51．6％，氨基酸序列之间同源性为62．5％，与斜带石斑 鱼两种芳香化酶氨基酸同源性分别为94．7％和97．9％。对8个科的10种鱼进行 了分子系统进化树分析，结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本 一致。 赤点石斑鱼脑芳香化酶(P450aromB)有广泛的组织分布，脑和垂体的表达 量很高，各组织表达最有明显的雌、雄差异；而性腺芳香化酶(P450aromA)表 达主要集中于垂体和性腺，且不论雌雄，其性腺表达量均高于脑垂体，表现为在 II 脑部，P450aromB表达量高于P450aromA，而在性腺，P450aromA表达最高于 脑部，P450aromB表达量高于P450aromA，而在性腺，P450aromA表达最高于 P450aromB，两种芳香化酶在脑垂体和性腺出现重替表达。 4．可芳香化和不可芳香化雄激素对赤点石斑鱼性逆转的作用 比较了可芳香化的17ct．甲基睾酮(17a—MT)、不可芳香化的17ct．甲基二羟睾 酮(MDHT)以及17ct—MT