产1脱氧野尻霉素微生物菌株的筛选鉴定及发酵工艺优化农产品加工及贮藏专业论文.docxVIP

学位论文储签字。戌春簿翱飙2011年4月15日学位论文版权使用授权书 学位论文储签字。戌春簿翱飙2011年4月15日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 金胆王些太堂 有关保留、使用学位论文的规定，有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅或借阅。本人 授权—j嗵坠E些太堂 可以将学位论文的全部或部分论文内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文者签名： l虱百．务 导师签名： 签字日期：2011年4月15日 签字日期：2011年4月15日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 3 产卜脱氧野尻霉素微生物菌株的筛选、鉴定及发酵工艺优化摘要 产卜脱氧野尻霉素微生物菌株的筛选、鉴定及发酵工艺优化 摘要 l一脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，DNJ)具有降血糖、抑制肿瘤转移、 抗病毒以及减肥等多种作用，仅通过从植物中提取根本无法满足市场需求。本 文采用微生物发酵途径来生产DNJ，筛选出产DNJ的菌株，利用多种诱变方法 对野生型的菌株进行诱变获得高产菌株，并确定其最佳的发酵条件。 以桑园土壤作为菌种筛选介质，采用琼脂平板鉴定法和反相高效液相色谱 检测法从263个菌株筛选出1株具有产DNJ能力的菌株，命名为SL．429。通过高 效液相检测、液质联用检测表明，待检测的发酵产物样品的分子量为163，化学 式为C6H13N04，产物鉴定为DNJ，该菌株的发酵产DNJ能力为0．017mg／ml。 SL．429菌株的菌落质地致密、表面呈较紧密的绒状或坚实、干燥、多皱； 孢子椭圆形或长圆形，壁表面光滑，其颜色为浅紫灰色。该菌株能够不同程度 的利用D．葡萄糖、麦芽糖乳糖等多种碳源，菌株能够在一定的程度上使硝酸盐 发生还原反应；明胶液化程度低，牛奶胨化效果较好。能引起淀粉轻度水解； 同时该菌株在培养过程中没有硫化氢气体以及色素的产生。我们筛选出的 SL．429菌株初步鉴定属于放线菌科链霉菌属中的浅紫灰链霉菌。 对SL．429菌株采用紫外诱变、N+诱变、硫酸二乙酯诱变以及紫外．DES复 合诱变，每种诱变均能得到DNJ产量高于出发菌株的突变菌株。紫外．DES复 合诱变得到一株DNJ产量最高的突变株，达到0．035mg／ml，其产量为出发菌 株产量的2倍，该突变株命名为TB．412。 通过单因素试验和响应面分析法对突变株TB．412产DNJ的发酵条件进行 优化，结果表明：当发酵温度为27℃、可溶性淀粉含量为69／1 00ml、发酵时间 为10d、发酵pH值为7．5时，发酵产物中DNJ的产量达到最大值。该条件时， DNJ产量达到0．043 mg／ml。 利用乙醇沉淀法、活性炭吸附法、透析法、AB．大孔树脂、阳离子交换树 脂、硅胶柱等多种分离纯化方法对发酵后的混合液进行分离纯化。发酵液经过 上述步骤纯化后，样品中的DNJ纯度比原发酵液中的纯度提高了约7．54倍， 纯度达到23．60％。能够满足作为食品添加剂使用的要求。 关键词：1．脱氧野尻霉素，筛选，诱变选育，发酵工艺，纯化 4 Screening，Identification Screening，Identification of a 1一Deoxynoj irimycin —prodmgMicrooMicroorganismg and 0ptimization of一 Fermentation Parameters ABSTRACT 1-deoxynojirimycin(DNJ)play many roles，including reduction blood sugar,inhibition of tumor metastasis and virus，weight lOSS and SO on．ne DNJ can be extracted from plants． but the amount iS lOW and not enough for market demand．In the present research,thes DNJ was obtained from the microbial fermentation,including isolation of DNJ-producing strain, screening of high yield of DNJ using different mutation methods，and optimization of fermentation conditions for DNJ production． Mulberry soil Was collected a