免疫组化_(00002)课件.pptxVIP

免疫组织化学技术及其分析;、免疫组化技术 ;1.1.1 原理 1.1.2 目的 1.1.3 常用方法 ; 应用免疫学基本原理—抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色(标记物有酶,荧光素等).来确定组织细胞内抗原，对其进行定位，定性，定量的研究.;1.1.2 目的;1.1.3 免疫组化常用方法 ;; 器材： 微波炉、高压锅、微量加样器、修复盒、湿盒、染色架、 免疫组化笔 、防脱载玻片、盖玻片、脱水机、切片机、 石蜡包埋机、摊片机、 烤片机、冰箱、电磁炉、 计时器、微型漩涡震荡仪。;1.2 器材 ;; 1.PBS ：0.01M磷酸盐缓冲液 （PH=7.4) 2.抗原修复液：0.01M柠檬酸盐（枸橼酸盐）缓冲液（PH=6.0) 3.固定液 ： 10%中性缓冲福尔马林：（甲醛1份+0.01M PH7.4的PBS 9份配制而成)，4%多聚甲醛等。 4.防脱剂：0.5%多聚赖氨酸。 5.包埋剂：石蜡。 6.一抗、免疫组化检测试剂盒。 7.TO生物透明剂、梯度酒精、3%H2O2 、中性树胶。 8.显色剂：苏木素染液 、DAB 试剂等 ;; 染 色;石蜡切片;;１.4.3常用免疫组化染色方法;19;1.4.5.1 SP法;（12） DAB显色,可在显微镜下观察染色程度； （13） 常水洗净； （14） 擦干后苏木素染色数分钟； （15） 流水冲洗； （16） 盐酸酒精分化，流水冲洗10分钟； （17） 脱水、透明、封片。;22;1.4.5.2 EnVision法;(１０) DAB显色,可在显微镜下观察染色程度； (１１) 常水洗净； (１２) 擦干后苏木素染色数分钟； (１３) 流水冲洗； (１４) 盐酸酒精分化，流水冲洗10分钟； (１５) 脱水、透明、封片。; 石蜡 人乳腺导管癌ER染色，胞核阳性，SP法， DAB染色;石蜡，人甲状腺癌CD44V6染色，胞膜阳性，SP法，DAB染色;抗GBM肾小球肾炎，IgG呈细线状 毛细血管壁沉积，＋＋＋＋（荧光 ×400）;免疫组织化学技术及其分析;29;1.5.2 染色中的常见问题及对策 ;1.5.3 .1 脱片的可能原因与对策 ;免疫组织化学技术及其分析;免疫组织化学技术及其分析;免疫组织化学技术及其分析; 用于鉴别肿瘤的组织来源； 细胞受体检测； 病毒性抗原检测； ???基因、抑癌基因蛋白与生长因子检测； 重新认识某些肿瘤的组织发生、发病机制；