蚕体内共生菌wolbachia的检测及对蚕卵子发育的影响特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

Dissertation Dissertation for Master’S Degree of S outhwe st Univers ity Molecular Detection of Endosymbionts 肋lbachia and Its Effection on Ovarian Differentiation in Silkworm Major： Raising of Special Economic Animals ” Field： f unctlonal genomlCS Supervisor：Prof．Xia Qingyou Candidate： Zhang Wenj i Chongqing，China May,2011 独创性声学位论文题目：盔笪盎堕垫垫鱼垒塑煎盔望匠豳盟墨!豳 独创性声 学位论文题目：盔笪盎堕垫垫鱼垒塑煎盔望匠豳盟墨!豳 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论 文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了特别标注。对本研究及 学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感 谢。 学位论文作者：弘责西压 签字日期： 如1『年6月上日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至 年 月止)。 学位论文作者签名：扔宣边 导师签名：筝乏荔殇凌}～导师签名：夕豸荔缀 签字日期：知l f年厂月朋 签字日期：夕∥年朗吒 中文摘要 中文摘要 蚕体内共生菌Wolbachia的检测及对蚕卵子 发育的影响 特种经济动物饲养专业硕士研究生 张文姬 指导教师夏庆友教授 摘要 沃尔巴克氏体(Wolbachia)是存在于节肢动物体内的一类呈母系遗传的细胞内共生细菌。 该菌通过不同机制参与调控寄主的生殖活动，可诱导胞质不亲和(C1)、孤雌生殖(PI)、雌 性化、杀雄、增强雌性繁殖力等生殖现象。 过去的几年里，在Wolbachia菌的作用机理、种群生物学和进化方面做了比较多的研究，但 主要集中在果蝇、蚊子和寄生蜂上。在鳞翅目中，关于Wolbachia的研究也有报道，蝴蝶和螟 类中Wolbaeh妇研究显示Wolbaehia具有不同的生殖调控作用。先前关于家蚕中的研究认为家蚕 中没有共生有Wolbachia菌。 本研究在家蚕全基因组数据库和Wolbaehia基因组序列的基础上，利用基因克隆、PCR、 Southern杂交方法实验证明了家蚕中Wolbaehia的存在，分析了Wolbaehia的系统进化及水平 传播；并通过抗生素消除Wolbaehia实验研究了Wolbaehia对家蚕的调控作用，主要研究结果 如下： 1．家蚕和野蚕体内Wolbachia特有基因的克隆及信息分析 本实验在不同地区的野蚕和不同品种家蚕个体总的基因组DNA中，均克隆获得了 Wolbaehia两个特异基因一wsp基因和触基因。其中wsp基因片段长593 bp，编码197个氨 基酸，具有一个结构域，该结构编码膜孔蛋白，介导微生物与宿主之间的关系。他基因片段 长571 bp，编码199个氨基酸，具有两个结构域，分别是微管蛋白和微管蛋白C末端结构域， 参与细菌的分裂。使用PCR检测方法，结果发现在大造生殖组织和体细胞组织中均有分布， 并且差异不大。另外通过在家蚕总RNA水平检测wsp基因和触基因的表达，结果没有发现 阳性条带。 2．Wolbachia的系统进化及水平传播的分析 Wolbaehia能够在不同的宿主间发生水平传播现象，也正因为如此，使得Wolbachia在自 I 西南大学硕士学位论文然界中分布广泛。本研究以触和wsp基因序列构建系统发育树，结果显示家蚕与野蚕的 西南大学硕士学位论文 然界中分布广泛。本研究以触和wsp基因序列构建系统发育树，结果显示家蚕与野蚕的 Wolbachia位于系统发育树的B群，与寄生蜂类和鳞翅目物种共生的Wolbachia关系最为接近。 根据Wolbachia的水平传播机制可以推测，野蚕体内的Wolbachia可能来自寄生蜂等膜翅目昆 虫，而野蚕体内的Wolbachia可能会通过捕食作用转移到微小花蝽等蝽类体内。家蚕中的 Wolbachia的来源可能有两个途径，一是野外采集桑叶上残留的Wolbachia，二是来自野蚕体内。 考虑到Wolbachia母性传播和家蚕驯养的过程，第二个可能性比较大。 3．Wolbachia基因水平转移的