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- -- 色谱分析复习资料 一．名词解释 capacity fact：容量因子，也称分配容量或容量比，用k′表示。其定义为：一定温度与压力下两相达平衡后，溶质在固定相和流动相中分配量（质量或摩尔数）之比. 分配系数：K,一定温度与压力下两相达平衡后，组分在固定相和流动相中浓度的比值; extra-column effect：柱外效应，即除柱内多种因素产生的色谱峰扩张外，其它产生峰扩张的因素之和：进样系统，系统连接管，检测器及其它柱外因素引起的峰扩张。 gradient elution：梯度洗脱，在HPLC分析中，控制流动相组成或洗脱强度随时间的改变而改变，以使极性差异较大的多个组分均能分离,同时谱峰间隔较均匀，分析时间尽量短。 HPSEC：高效体积排阻色谱法,即以多孔性填料为固定相，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离的液相色谱方法。常用于肽和蛋白质的分子量分布测定及多步分离纯化程序中。其填料一般有硅胶基质和合成高聚物基质以及高交联多糖型凝胶三种。 ODS：十八烷基键合硅胶，又称C18. 典型的反相色谱柱，表面键和的基团为非极性羟基，适于分离弱极性，中等极性，较强极性及可电离的酸碱性有机物。 基线：在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的连续的响应信号，一般是一条直线; 峰面积：色谱曲线与基线间所包围的面积; 半峰宽：亦称半宽度,半峰宽度,指色谱峰高一半处的宽度 标准偏差σ：正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。 死时间t0:流动相流过色谱柱所需时间(不保留组分流过色谱柱所需时间) 调整保留时间:tR’=tR-t0，指扣除死时间后的保留时间。 保留时间tR—进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。 相对保留值:(用γ或α表示,也称分离因子)两个组分调整保留值之比=tR2’/tR1’=VR2’/ VR2’; 分离度: 相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。 色谱柱效：每米柱长具有的理论塔板数定义为色谱柱效，它是衡量色谱柱分离效能高低的一种量度。 1.在进行HPLC分析时，为防止分析柱污染，应采取哪些措施？ 1）．加一个保护柱（预柱），其固定相性质应与分离柱一样或相近。 2）．样品要尽量净化，如沉淀蛋白，去除色素和无机盐等。 3). 样品分析结束后,应及时用适当溶剂清洗色谱柱. 2.乙醇的沸点为78.3℃，丁酮的沸点为79.6℃，在气相色谱柱上是否一定是乙醇先出峰，丁酮后出峰，为什么？ 不一定.因为保留值除与样品组分的沸点有关外，还与样品及固定相的极性有关。乙醇（bp 78℃）和丁酮（bp 80℃）二个组分在非极性柱上，因为组分出峰的顺序由蒸汽压决定，沸点高的保留时间长，所以乙醇先出峰，丁酮后出峰；在极性柱上，沸点和分子之间作用力同时作用，在强极性柱上分子间的作用力其主要作用，按极性大小出峰，乙醇的极性比丁酮大，所以丁酮先出峰，乙醇后出峰。 4.电喷雾离子化的原理是什么?离子化过程分哪三步？ 原理：在喷针针头与施加电压的电极之间形成强电场，该电场使液滴带电，带电的溶液在电场的作用下向带相反电荷的电极运动，并形成带电的液滴。由于小液滴的分散比表面积增大，在电场中迅速蒸发，结果是带点液滴表面单位面积的场强极高，从而产生液滴的“爆裂”。重复此过程，最终产生分子离子。 ESI离子化可分为一下三个步骤：1）形成带电液滴：在ESI高压电极处施以正的高电压，小液滴从毛细管高速喷出而带有过量的正电荷，从而产生电化学反应，通过溶剂组分氧化而去掉负离子或通过毛细管自身的氧化而增加正离子，当在ESI高电压极处施以负的高压，小液滴从毛细管高速喷出而带有过量的负电荷； 2）溶剂蒸发和小液滴破裂：随着溶剂蒸发，液滴半径缩小，液滴表面电荷斥力增大，达到一定半径时，克服表面张力而裂解，重复此过程形成非常小的液滴； 3）形成气相离子：对于半径=10nm液滴，电荷的斥力作用导致离子从液滴表面蒸发而不是液滴的分裂 9、HPLC与GC比较，其特点？ 分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只占有机物总数的20%；HPLC可以分析较高沸点、较高分子量的、稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。 流动相的作用：GC采用的流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，与组分之间基本没有作用；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的条件自由度较大。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过流动相组成来控制和改进分离。