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survivin反义寡核苷酸治疗人涎腺腺样囊性癌的实验分析口腔临床医学专业论文
河北医科大学
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中文摘要Surv
中文摘要
Surv i V i n反义寡核苷酸治疗人涎腺腺样囊性癌的实 验研究
摘 要
目的:涎腺腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma。 SACC),是一种常见的涎腺恶性肿瘤。其恶性程度高,侵袭 性强,易复发、易早期转移。且对放疗、化疗不敏感,手术 治疗难以根除。因此,寻求有效的辅助性治疗手段非常必要。 survivin是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of aoptosis proteins,IAP)家族的新成员,特异表达于人的胚胎组织以 及多数人类肿瘤细胞。在成人,由于survivin主要特异地表 达于肿瘤组织,使得反义survivin基因治疗具有良好的靶向 性、特异性及安全性。本实验利用人涎腺腺样囊性癌高转移 细胞系Acc.M探讨survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对survivin基因表达的影响,及 其诱导肿瘤细胞凋亡的效果;同时建立Acc.M裸鼠移植瘤模 型,探讨survivin反义寡核苷酸对该肿瘤细胞形态结构、细 胞凋亡以及肿瘤生长速度的影响,为人涎腺腺样囊性癌的临 床基因治疗提供实验依据。
方法:1材料(1)人涎腺腺样囊性癌高转移细胞系 (Acc.M)。(2)针对survivin基因的反义寡核苷酸片段。(3) 15只SPF级雌性Balb/c裸小鼠,4.5周龄。2方法(1)细 胞培养:Acc.M细胞培养于RPMll640含胎牛血清和双抗的 培养液中,5%C02、37。C恒温孵育。(2)体外实验:设计合 成针对survivin基因的反义寡核苷酸片段。脂质体介导
中文摘要survivin反义寡核苷酸转染Acc.M细胞,通过RT-PCR,
中文摘要
survivin反义寡核苷酸转染Acc.M细胞,通过RT-PCR, Western.blot检测survivin表达的改变,MTT测定细胞增殖 抑制,流式细胞术测定细胞凋亡率。(3)动物实验:建立裸 鼠皮下移植模型,待肿瘤直径达1.0cm,采用survivin反义寡 核苷酸联合脂质体作用于裸鼠移植瘤局部,并设正义管核苷 酸(sense oligonucleotide,SODN)对照组和空白对照(NS) 组,每4天瘤内注射一次,共治疗l 3天,第14天麻醉后处 死裸鼠,观察移植瘤体积和瘤重的变化,流式细胞术测定细 胞凋亡率,HE染色观察移植瘤结构改变。
结果:1.转染ASODN组survivin表达下降,其中mRNA 表达下降达43.03%,显著低于SODN组、脂质体组和空白对 照组(PO.05),蛋白表达下降36.03%,显著低于SODN组、 脂质体组和空白对照组(PO.05)。细胞凋亡率明显提高, 流式结果显示ASODN组细胞凋亡率为25.9%。而SODN组为 1.98%,脂质体组2.08%,空白对照组为1.93%。前者与后三 组各组间均有显著差异(PO.05),而后三组之间无差别(P
O.05)。MTT试验显示转染ASODN组细胞增殖明显受抑制, 且与浓度有一定依赖性,ASODN组IR均增高,800nmol/L并I 1000nmol/L组细胞抑制率分别达37.61%和46.42%,显著高于 其余各组。而SODN组、脂质体组与空白组间无明显差异。 2.裸鼠移植瘤治疗结束时,NS组、SODN组、ASODN组体 积均数分别为(以cm3为单位):3.09+0.06,2.92+0.13, 1.309+0.27。ASODN组裸鼠肿瘤生长明显受到抑制,抑制率 为57.6%。NS组、SODN组、ASODN组肿瘤质量均数分别为 (以g为单位):4.97+0.54,4.40-a:0.51,2.32+0.87,ASODN组 抑瘤率为53.4%。肉眼观察:肿瘤椭圆形,结节状,有包膜,
中文摘要表面光滑,个别瘤体表面有破溃
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