《SNT1182.1-2003-禽流感抗体检测方法琼脂免疫扩散试验》.pdfVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1182.1-2003 禽流感抗体检测方法 琼脂免疫扩散试验 Detectionantibodiesagainstavianinfluenzavirus- Procotolofagargelimmuno-diffusiontest 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检疫总 局 SN/T1182.1-2003 前 言 本标准根据OIE/Chapter2.1.14,4thedition,2000,《诊断方法和疫苗标准手册)(Manualofstand- ardsfordiagnostictestsandvaccines)起草 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国珠海出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人:潘文波、薛景山、徐海聂、廖秀云。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T1182.1-2003 禽流感抗体检测方法 琼脂免疫扩散试验 范 围 本标准规定了禽流感琼脂免疫扩散试验操作规程。 本标准适用于检测禽类血清中是否含有禽流感(AI)病毒抗体。主要适用于禽类禽流感检疫、疫情 监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格及试验方法 原 理 抗原和抗体的分子量一般都在20万道尔顿以下，抗原及其特异性抗体在凝胶中从高浓度区域向低 浓度区域扩散时所受阻力很小，基本上呈自由扩散形式。由于不同抗原分子的分子量、结构、形状和电 荷量不同，因此其扩散系数不同，在凝胶中的扩散速度也就不同。当抗原与相应抗体经扩散后在凝胶中 相遇，形成抗原抗体复合物，若两者在相遇处比例适当，则形成最大的复合物。由于复合物的分子量增 大，颗粒增大，因而不再继续扩散而产生沉淀，呈现出线状或带状，其形成的线状或带状被称为免疫沉淀 线或免疫沉淀带，因此，可根据抗原与被检血清之间是否出现沉淀线来判定被检血清中是否存在特异性 抗体 。 4 材料准 备 4.1 试剂:磷酸二氢钠(NaH,PO,，2H,O),磷酸氢二钠(Na,HPO.,·12H}O),氯化钠(NaCL),叠氮 钠，琼脂糖，均为分析纯。 4.2 琼脂扩散试验抗原、标准阳性血清:由指定单位供应。按说明书使用 4.3 器材:吸管、量筒、平皿(规格为90mmX15mm)、三角瓶、外径约5mm金属打孔器、微量移液器 和微量吸头、观察灯等。 4.4 被检血清:按常规方法采血分离血清。应无溶血，无细菌污染。保存于4C. 5 操作方法 51 试验 用水 本标准所用水应符合GB/T6682-1992中三级水(三蒸水)的规格要求。 5.2 琼脂板的制备 5.2.1 琼脂溶液的配制参见附录A. 5.2.2 制板 待琼脂溶液自然冷却至约56℃时，将直径为90mm洁净灭菌的平皿置于水平平台上，每 个平皿加 15mL，使凝胶厚度达2mm-3mm，加盖平皿盖，待自然冷却凝固后.将平皿倒置湿盒中，40C SN/T 1182.1-2003 冰箱密封备用。 5.3 打孔 反应孔现用现打。从冰箱内取出琼脂板，按图1或图2打孔，孔径约5mm，孔距2mm-5mm。将 孔中的琼脂用针头