实验 高效液相..ppt

2.6.4收集器： 液相层析是在无人看管的情况下收集经柱分离后流出物中的各组分。 收集方式：有按保留时间收集、保留体积收集或分离组分收集。 2.6.5记录仪： 将检测到的信号随时记录下来，记录的方式有：单笔记录、双笔记录和计算机记录。 3 层析柱制备技术 3.1层析柱的分类 目前能生产高效液相层析柱的的厂家很多，产品种类繁多。但是从其用途和性能上来分类，可以把高效液相层析柱大致有两类。 (1)按照层析柱型号分类 超微分析柱：这种一般是无填料毛细管柱，主要用于微量高效液相层析(Micro- High Performance Liquid Chromatography，简称Micro-HPLC)的超微量或痕量分析。 微量分析柱：这种柱的内径在1－3mm之间，主要用于高效液相层析的微量分析。 分析柱：这种柱的内径在5－10mm之间，主要用于高效液相层析的常规分析或微量制备。 半制备柱：这种柱的内径在10－20mm之间，主要用于高效液相层析的少量制备，因研究需要制备少量的纯样品。 制备柱：柱内径在20－75mm，主要用于高效液相层析的制备，具有一定得分纯化规模，需要样品的纯度比较高，制备的量比较大，如某些标准品的大量制备。 (2)按照层析柱的填料分类 吸附层析柱：(硅胶、氧化铝、氧化镁、等) 疏水层析柱：(烷基硅胶，C4、C8、C12、C18、苯基等) 排阻层析柱：(聚苯乙烯、硅烷化的大孔径微粒、灌注层析介质等) 离子交换层析柱：(阴离子和阳离子交换剂) 离子对层析柱：(辛基磺酸反离子、丁铵反离子) 3.2层析柱的性能： 一支层析柱的指标包括柱的形状、结构、层析介质和填充技术等，统称为层析柱技术(column technology)。 3.3层析柱的基本结构 3.3.1层析柱 层析柱主要包括柱管、两端接头、密封圈和塞板等级部分。其简单工作原理是利用接头与压帽的挤压和一定角度的配合，迫是密封圈紧紧抱住柱管，与接头之间形成线密封，使其在高液压下不渗漏。如图9所示。 1柱管，2压帽，3卡套，4筛板，5接头，6卡套，7螺丝，8输液管 3.3.2柱管的材质 高效液相层析柱大多数都是以不锈钢采质制成的，国际上多是用耐酸碱性较好抗氧化性较强的315和314好不锈钢材，用这种材料制成的柱可以延长其使用寿命 3.3.3柱的填充技术 常用的高效液相层析商品柱，通常是已经填充好的，无需自己填充。但是对于某些特殊的填料或较大型的制备柱，难以购到现成的商品柱，一般需要自己填充。对于制备型柱的填充，根据柱管的粗细有三种填充方法， (1)高压匀浆填充法 对于键合相填料反相层析，以异丙醇为溶剂，配成2%的悬浮液（W/V），用气动泵提供压力，在50-60兆怕的条件下将填料压入柱内，填充速度大约在1cm/min左右。 (2)径向压缩填充法 将填料以干法的形式填入柱内，然后放入一个特制的不锈钢加压设备内，压缩空气被引入容器和管壁之间，产生对管壁和填充床的径向压力，由于塑料管壁具有一定的可缩性，在压缩空气的作用下慢慢变形，从而减少或消除了填充床管壁区的自由空隙，这样填充出来的层析柱很均匀，柱效高。 (3) 轴向压缩填充法 将柱头卸下，把填料装入柱内，盖上筛板，固定好柱头，然后在柱底的活塞加压，利用活塞上的压强将填料往柱内推紧，最后固定底部的活塞。 (4)填料： 表1列出了不同基质多孔硅胶耐压的上限值。 多孔硅胶 粒度(μm) 孔径(nm) 表面积(m/g) 孔体积(μm/g) 限压(兆帕) LiChrosorb Si 60 5 6 475 0.76 57 LiChrosorb Si 100 10 10 287 1.02 57 Nucleosil 100-5 5 10 300 1 57 Hypersil 5 12 200 -- 57 LiChrospher Si 100 10 12 256 1.2 57 LiChrospher Si 300 10 30 250 2 14.2 Spherosil XOB 075 5 30 100 0.7 57 Spherosorb SG 30F 10 30 -- -- 12.1 Vydac TP 5 33 100 -- 57 LiChrospher Si 500 10 50 45 0.88 35.7 LiChrospher Si 1000 10 100 19 0.72 57 LiChrospher Si 4000 10 385 47 0.78 57 4 高效液相层析的分离模式 高效液相层析的分离模式多数是与常规液相