实验[1]._蒽酮比色定糖法..pptVIP

实验一：蒽酮比色定糖法 糖是世界上存在最多的一类有机化合物，也是人类所需要的最基础的物质。 CO2 光合作用 糖 一切含碳物质 分解代谢 合成代谢 糖 类 一、糖的概念和分类 1、糖的组成： CH2O ，可以写成Cn(H2O)m 糖又称为碳水化合物（Carbohydrate) 脱氧核糖 C5H10O4 鼠李糖 C6H12O5 乙酸C2H4O2，符合Cn(H2O)n 这些糖不符合Cn(H2O)n 酮基 醛基 定义：多羟基的醛类或酮类化合物，以及它们的衍生物或聚合物。 (HCOH)n H2C OH CH O H2COH C O H2COH (HCOH)n 2、糖的分类： 糖 单糖 二糖 多糖 葡萄糖 果糖 蔗糖 麦芽糖 淀粉 纤维素 不能再水解的糖 水解后能生成两分子单糖 水解后能生成多个单糖 1、能源物质：淀粉，糖原 2、碳源：各种有机物的碳架 3、结构物质：纤维素，肽聚糖，几丁质 4、功能物质(细胞识别的信息分子)：病毒识别，抗原抗体反应等 二、糖的生理功能 与膜蛋白和膜脂相连的糖——通信天线 一、实验目的 学习分光光度法的基本原理 学习对水果中糖含量进行测定的方法 二、实验原理 分光光度法基本原理： 物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了研究。皮埃尔·布格（Pierre Bouguer）和约翰·海因里希·朗伯（Johann Heinrich Lambert）分别在1729年和1760年阐明了物质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系；1852年奥古斯特·比尔（August Beer）又提出光的吸收程度和吸光物质浓度也具有类似关系，两者结合起来就得到有关光吸收的基本定律——布格－朗伯－比尔定律，简称比尔－朗伯定律。 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律 朗伯-比尔定律 A=lg(1/T)=Kbc A：为吸光度, T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度 K: 摩尔吸收系数。它与吸收物质的性质及入射光 的波长λ有关。 c：为吸光物质的浓度 b：为吸收层厚度 物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比. 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。 三、实验特点 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。 四、实验试剂 蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用； 标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)： (可滴加几滴甲苯作防腐剂)； 糖样品溶液。 五 、实验操作步骤 1. 制作标准曲线： 取干试管5支，依次加入标准糖溶液 0，0.1，0.2，0.4ml,0.8ml并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。沸水浴准确煮沸10 min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620（同时测定样品）。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。 管号 1 2 3 4 5 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.4 0.6 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.6 0.4 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 40 60 2. 样品含糖量测定：葡萄汁溶液样品溶液稀释1000倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL蒽酮 试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后冷却10min后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 计算： 样品糖含量(%) =(C×V1×D/W×V2×106)×100 C-标准曲线上查出的糖含量（μg） V1-提取总体积（ml） V2-测定总体积（ml） D-稀释倍数 W-样品重量（g） * *