《SNT1167-2002-鹿流行性出血病琼脂免疫扩散试验操作规程》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1167一 2002 鹿流行性出血病琼脂免疫扩散试验 操 作 规 程 Protocolofagargelimmunodiffusiontestfor epizootichaemorrhagicdiseaseofdeer 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检疫总 局 SN/T 1167-2002 前 言 本标准是在参考国际兽疫局(OIE)及美国国家兽医实验室的操作规程和总结我国在这一领域多年 实践经验的基础上制定的。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:杨晶焰、应雪松、杨建明、徐自忠。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1167-2002 鹿流行性出血病琼脂免疫扩散试验 操 作 规 程 1 范围 本标准规定了鹿流行性出血病琼脂免疫扩散试验的操作规程。 本标准适用于动物鹿流行性出血病琼扩抗体的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987) 3 缩 略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 AGIDTest 琼脂免疫扩散试验。 3.2 EHD 鹿流行性出血病。 4 原理 抗原及其特异性抗体在凝胶中从高浓度区域向低浓度区域扩散时所受阻力很小，基本上呈自由扩 散形式。由于不同抗原分子的分子量、结构、形状和电荷量不同，因此其扩散系数不同，在凝胶中的扩散 速度也就不同。当抗原与相应抗体经扩散后在凝胶中相遇，形成抗原抗体复合物，若两者在相遇处比例 适当，则形成最大的复合物。由于复合物的分子量增大，颗粒增大，因而不再继续扩散而产生沉淀，呈现 出线状或带状，其形成的线状或带状的 特“异性屏障”称为免疫沉淀线或免疫沉淀带。 5 试剂和材料 5.1抗原:用从美国国家兽医实验室引进的EHDV-2型国际标准毒株，参考该实验室的抗原制备方法 制备，为群特异性抗原，适用于各型EHD的检疫，由指定单位提供。 5.2 标准阳性血清:琼脂扩散效价在 1，8以上，由指定单位提供。 5.3 平皿。 5.4 微量移液器。 5.5微量滴头。 5.6 三角烧瓶。 1 SN/T 1167-2002 5.7 琼脂糖:分析纯。 5.8 抓化钠(NaCD:分析纯。 5.9 叠氮钠:分析纯。 5.10 水:符合GB/T6682-1992分析实验室二级水规格。 6 操作步骤 6.1 琼脂凝胶平板的制备:称取琼脂糖0.9g,抓化钠0.85g，加人 100ml水，经68.94kPa,10min高 压或电磁振荡煮沸溶解后，冷却至45C，加人。.01g/100mL叠氮钠。每个平皿加融化琼脂，使琼脂板 厚度为2.5mm-2.8mm，待凝固后置4℃冰箱片刻。 6.2 打孔:中间1