《SNT1174-2003-猴D型逆转录病抗体检测方法》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1174-2003 猴D型逆转录病抗体检测方法 AntibodydetectionmethodsforsimianretrovirustypeD 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 匡 国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 肩 SN/T 1174-2003 .山 J . .J ‘. oli 台 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国云南出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人:贾建军、周晓黎、徐自忠、应雪松。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T1174-2003 猴D型逆转录病抗体检测方法 范围 本标准规定了猴D型逆转录病毒病抗体检测方法和结果判定。 本标准适用于猴D型逆转录病毒病的检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987) 3 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 CPE 致细胞病变作用。 3.2 TCID9o 半数组织培养感染量。 3.3 ELISA 酶联免疫吸附试验。 3.4 W estern blot 蛋白印迹试验。 3.5 SOS SIDS聚丙烯酞胺凝胶电泳。 4 原理 4.1 ELISA原理 ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学 特性 ，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异结 合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜 色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体 或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性 和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。 SN/T 1174-2003 4.2 WesternBlot原理 先将被检的抗原或抗体蛋白经电泳分离并转移至一种固相支持体上，用制备好的针对抗原蛋白的 特异性抗体或提纯的抗原作为探针检测已固定好的抗原蛋白或抗体蛋白.这个探针用特定的放射或酶 显色系统进行标记，通过抗原抗体反应并有显色反应来判断被检物是否的特异的抗体或抗原物质。 5 试剂和材料 5.1水:本标准所用水应符合GB/T6682-1992中二级水的规格。 5.2 病毒:猴艾滋病D型逆转录病毒(simianretrovirustypeD,SRV)，由指定单位提供。 5.3血清:猴艾滋病D型逆转录病毒阳性血清、阴性血清由指定单位提供。 5.4 被检血清。 5.5 细胞:Raji，由指定单位提供。 5.6培养液:1640培养基中加人10%的胎牛血清(经56`C30min灭活)含青霉素200IU/mL,链霉素 200lag/mL, 5.7维持液和稀释液:维持液为1640培养基中加人2%的胎牛血清(经56V30min灭活)含青霉素