《SNT1177-2003-猴B病毒相关抗体检测方法》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1177-2003 猴B病毒相关抗体检测方法 ProtocoloftestforBvirusrelatedantibodiesinmonkey 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 匡 国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 层 SN/T1177-2003 前 言 本标准的附录A为规范性附录. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国云南出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人:徐维加、董俊、周晓黎、徐自忠。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1177-2003 猴B病毒相关抗体检测方法 范 围 本标准规定了猴B病毒相关抗体的检测方法。 本标准适用于猴B病毒相关抗体的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696;1987) 3 缩 略语 下列缩略语适用 于本标 准。 CPE 致细胞病变作用 。 3.2 TCIDso 半数组织培养感染量 。 3.3 玻片EIA 玻片酶联免疫吸附试验。 3.4 SPA 葡萄球菌A蛋白。 3.5 HRP 辣根过氧化物酶 。 4 原理 玻片EIA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学 特牲，也不影响酶的生物学活性。此种酶可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异结合。滴加底 物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应.因 此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量 呈正 比。 5 试荆和材料 下列试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。 SN/T1177-2003 5.1 水:本标准所用水应符合GB/T6682-1992中一级水的规格. 5.2病毒:人单纯疙疹病毒I型(HSV-1)毒株，由指定单位提供。、 5.3 血清:人单纯疙疹病毒工型阳性血清、阴性血清由指定单位提供。 5.4 被检血清。 5.5 细胞:Ver。传代细胞，由云南出人境检验检疫局提供。 5.6 SPA-酶(辣根过氧化物酶)(见第A.2章):由指定单位提供。 5.7 培养液:199培养基中加人 10写无 HSV-1抗体的胎牛血清(经56℃ 30min灭活)含青霉素 200IU/mI、链霉素200pg/mL, 5.8 维持液和稀释液:199培养基中加人2%无HSV-1抗体的胎牛血清(经56℃30min灭活)含青霉 素200IU/mL,链霉素200pg/mL, 5.9细胞瘫 液、终止液、底物液、缓冲液(pH7,3),0.25%胰酶等(见附录A:第A.5章、第A.:章、 第A.4章、第A.3章、第A.6章)。 6 器械和设备 6.1倒置显微镜、普通显微镜、二氧化碳培养箱、冰箱(-20℃保存血清、-70℃保存种毒)。 6.2 玻片(印有 10 40个小孔)、微量移液器(20pL-200pL), 7 玻片EIA 7.1 操作方法 7.1.1抗原玻片制备:HSV-1感染Ver。细胞，出现 “50%-75%”病变时