《SNT1171.1-2003-山羊关节炎-脑炎抗体检测方法酶联免疫吸附试验》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1171.1-2003 山羊关节炎一脑炎抗体检测方法 酶联免疫吸附试验 Detectionofantibodiesagainstcaprinearthritis-encephalitisvirus- Protocolofenzyme-linkedimmunosorbentassay 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 匡 国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 婿 SN/T1171.1-2003 月U 吕 本标准根据OIE/chapter2.4.4((诊断试验和疫苗标准手册》起草. 本标准的附录A、附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、国家质量监督检验检疫总局标准法规研 究中心 。 本标准主要起草人:杨宝华、崔路、曾宪生、张艳。 本标准是首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1171.1-2003 山羊关节炎一脑炎抗体检测方法 酶联免疫吸附试验 范 围 本标准规定了应用酶联免疫吸附试验(ELISA)批量检测山羊血清中抗山羊关节炎一脑炎病毒抗体 的方法。 本标准适用于山羊关节炎一脑炎的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。 2 试验原理 酶联免疫吸附试验(ELISA)的基本原理是将酶分子与抗体或抗体共价结合，此种结合不改变抗体 的免疫反应活性和酶的生化活性，酶标记抗体可与吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合，随 后加人的底物可在酶分子的作用下呈现颜色反应，因而可借颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色 反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈正比，通过酶标仪可检测颜色反应的光密度值。本标准的 反应原理就是将CAE病毒抗原包被在96孔聚乙烯微量板上，接着加人按一定比例稀释的待检血清，待 反应一定时间后，加人酶标记的抗山羊免疫球蛋白抗体，反应完成后 ，加人底物显色并检测反应结果。 3 试验准备 3.1 仪器 二氧化碳培养箱、酶标仪、倒置显微镜、超速离心机、高速离心机、细胞培养瓶、多孔道微量加样器、 96孑L聚乙烯微量板等。 3.2 试剂 3.2.1 THE缓冲液 0.01mot/LTris-HCI,pH7.4,0.01mol/L氯化钠，0.001mol/LEDTA, 3.2.2 洗涤液 含0.05%Tween-20的双蒸水。 3.2.3 pH7.2PBS溶液 氯化钠8.00g,氯化钾 。.20g,磷酸氢二钠 1.15g,磷酸二氢钾 。20g，水溶至 1000ml。 3.2.4 高盐稀释液 含0.050aTween-20,10%小牛血清的0.5mol/L氯化钠溶液。 3.3 标准抗原与血清制剂 CAE种毒、标准抗原、阳性血清、阴性血清由指定单位提供。抗山羊IgG过氧化物酶结合物按市售 说明书使用 。 试验程序 4.1 ELISA操作程序 4.1.1 于96孔聚乙烯微量板中加人用PBS(pH7.2)稀释的50I}L最适稀释度的CAEV抗原，封 口后 置40C48h，用洗涤液洗板二次，甩干后封口于一20℃保存备用(用前洗板四次)。 I SN/T1171.1-2003 4.1.2 被检