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TSA对水牛体细胞增殖及核移植胚胎发育影响的研究摘要 TSA对水牛体细胞增殖及核移植胚胎发育影响的研究 摘要 探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对水牛成纤维细胞增殖和Cx43 基因表达的影响。传代培养六代的水牛成纤维细胞用不同浓度的TSA处理 不同时间，采用MTT法对水牛成纤维细胞增殖情况进行检测，并用实时荧 光定量PCR技术对水牛成纤维细胞的Cx43mRNA变化情况进行检测。结 果发现，TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有明显的抑制作用，且呈时间、 浓度依赖性；适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间可以显著提高 Cx43基因的表达水平，且随处理浓度、时间的不同出现动态变化，当TSA 处理时间为48h，处理浓度为O．1、O．5、lgrnol／L时，Cx43 mRNA的表达量 分别约是对照组的7倍、9倍、11倍，显著高于对照组(PO．05)。 探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理水牛体细胞核移植胚胎对其 随后发育能力的影响。用不同浓度的TSA(O nmol／L、5 nmol／L、50 nmol／L、 100 nmol／L)处理核移植重构胚10h，各组间的核移植胚胎分裂率无显著差 异(PO．05)，当TSA处理浓度为50 nmol／L时，重构胚的囊胚发育率显 著高于对照组(22．0％Vs 13．O％，P0．05)。浓度为50 nmol／L的TSA处理 核移植重构胚不同时间(O、lO、24、36、48h)，核移植胚胎的分裂率各组 间无显著差异(P珈．05)；但TSA处理时间为10、24、36、48h的处理组 其囊胚发育率均显著高于对照组(P如．05)，然而各处理组之间囊胚率并无 显著差异(尸珈．05)，其中TSA处理时间为24h组重构胚的囊胚发育率较 高(26．4％)。结果显示，50nmol／L的TSA处理水牛体细胞核移植重构胚 24h，能显著提高水牛体细胞核移植效果。 采用免疫荧光染色技术测定了间隙连接蛋白Cx43在水牛体外受精 (IVF)胚胎和体细胞核移植(SCNT)胚胎早期发育过程中的表达模式。 结果发现，Cx43蛋白在胚胎发育的各个时期均有表达，其中在2、4、8细 胞期，Cx43蛋白在两种类型胚胎的卵裂球中均有大量表达，而在桑椹胚和 n 囊胚期，Cx43蛋白的表达明显减弱，且体细胞核移植胚胎中Cx43蛋白的 囊胚期，Cx43蛋白的表达明显减弱，且体细胞核移植胚胎中Cx43蛋白的 表达明显弱于同时期的体外受精胚胎。 以上研究结果表明：(1)TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有抑制作用， 并呈时间、浓度依赖性：(2)适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间 可以显著提高Cx43基因的表达水平；(3)适宜浓度的TSA处理水牛体细 胞核移植重构胚一定时间可以提高其胚胎发育能力；(4)Cx43蛋白在早期 胚胎发育中起着重要的作用，水牛核移植胚胎的Cx43蛋白表达量低可能是 其发育潜能较低的主要原因。 关键词：水牛TSA Cx43 体细胞核移植 早期胚胎发育 Ⅱl EFFECTS EFFECTS OF TRICHoSTATIN A ON THE PRoLlFERATIoN oF BUFFALo SoMATIC CELLS AND DEVELoPMENT oF NUCLEAR TRANSFER EMBRYoS ABSTRACT Effects of Trichostatin A treatment on cell proliferation and expression patterns of Cx43 in buffalo fibroblasts were investigated．Cells were grown to confluence at passage 6 and subsequently treated with TSA of different concentration and treated time．The patterns of cell proliferation were investigated by the methods of MTT colorimetric assay,and also the expression patterns of Cx43 in buffalo fibroblasts were detected after TSA—treated by using real time fluorescence PCR．The results showed that the treatment of TSIA could significantly inhibit cell proliferation in buffalo fibroblasts，and the effects