eae时室周器官正中隆起的形态学研究人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

中文摘要但灌注液为1．5％的多聚甲醛和2．5％戊二醛磷酸缓冲液 中文摘要 但灌注液为1．5％的多聚甲醛和2．5％戊二醛磷酸缓冲液 (0．1M，pH7．2)灌注完毕取材：将脑腹面朝上，在视交叉 两侧各lrnm平行做两道矢状切口向后延伸至漏斗柄，在漏 斗柄后做一冠状切口，在距离脑底面3mm处做一平行切口， 所取下的脑块即含ME，观察时腹面朝下，上面的小凹即为 脑室面，视交叉为前，漏斗柄为后。将取1-ME用PB冲洗 后置于2．5％戊二醛(4℃)中。双蒸水冲洗，梯度酒精脱水， 叔丁醇置换，二氧化碳临界点干燥。真空喷金。日立S一3500N 扫描电镜观察，照相。 4透射电镜样品制备：取材过程同扫描电镜样品制备， 在灌注固定后，取ME组织块放入4％戊二醛中固定，l％锇 酸固定1h，Epon812包埋，LKB—V型超薄切片机切片，T 一7500N型透射电镜观察照相。 5 TUNEL实验组样晶制各：动物的麻醉、灌注、取材和 后固定、石蜡切片同光镜标本制各，常规脱蜡、入水，蛋白 酶K消化，0．3％H202甲醇液封闭，冰}：透化后加上TUNEL反 应液，POD转化，DAB显色。HE复染，常规脱水、透明、 封片。OnMPUS万能显微镜观察并照相。 6凋亡细胞评价标准及统计学处理：强微镜下观察，以 胞核固缩，深棕黄色的细胞为阳性染色。随机选取5个不重 叠视野，采用自动免疫组化分析系统Version2．0记录阳性细 胞数。采用单因素方差分析，有显著差异者用q检验进行两 两比较，以p0．05为有显著差异。 结果：1光镜观察结果：HE染色，对照组ME室管膜 细胞呈单层柱状排列，EAE潜伏期、发病极期，室管膜细胞 排列密集，呈双层或复层排列，以发病极期最明显。柔膜反 中文摘要应期和恢复期接近于对照组。室管膜细胞排列的密集程度， 中文摘要 应期和恢复期接近于对照组。室管膜细胞排列的密集程度， 测量每50x50#m2细胞数，发病极期潜伏期柔膜反应期和 恢复期。 2扫描电镜观察结果：对照组ME处少纤毛区可见丰富 的分泌颗粒，大小均匀，表面光滑，直径0．2—3．0#m。实验组 ME表面的分泌颗粒形态、分布形式、大小出现明显变化， 在柔膜反应期大的分泌颗粒(赢径约1．0一1．5舯)减少，小的 分泌颗粒(直径约O．3舯)增多，排列更加稠密；潜伏期时 分泌颗粒以大的为主，排列稀疏；发病极期时ME表面分泌 颗粒减少，相互粘连似葡萄状，室管膜上可见大量吞噬细胞 样细胞附着，于这些细胞上还可见到正在形成的分泌颗粒； 恢复期室管膜表面分泌颗粒基本正常，有的部位相互粘连成 团状或条索状，仍可见到散在吞噬细胞样细胞。 3透射电镜观察结果：EAE大鼠免疫后6小时，柔膜反 应期时，可见室管膜细胞内大量细胞器聚集于细胞的游离 缘，线粒体密集，室管膜下层细胞出现胞质肿胀，充满水肿 空泡，直径约400．600nm，在血管周围可见丰富的线粒体聚 集现象。潜伏期时，室管膜细胞不同的分泌现象在该处皆可 见到。有的分泌颗粒呈球形，赢径约5．0#m，与室管膜细胞 脱离；有的分泌颗粒呈蘑菇状，部分与室管膜细胞相连，无 胞膜，内含许多有膜囊泡，结构松散。于发病极期可见室管 膜细胞向外凸起，形成较大的分泌颗粒，长椭圆形，有胞膜， 最大径约2．5#m，未见空泡，均质状，较致密，细胞内有溶 酶体吞噬现象； 于室管膜上可见较多的直径为250．400nm 的分泌颗粒。在恢复期室管膜细胞表面也可见到分泌颗粒， 但形态不规则，最大径3．5#m，内含多种囊泡，约50个，大 中文摘要小不等，圆形、椭圆形；紧贴于室管膜细胞下层，可见电子 中文摘要 小不等，圆形、椭圆形；紧贴于室管膜细胞下层，可见电子 密度高的细胞，胞质浓缩，细胞核皱缩，折曲，可能是小胶 质细胞。 4 TUNEL实验组观察结果：对照组仅见个别凋亡细胞。 计数50×50／zm2范围内凋亡细胞数(爿土s)。潜伏期： 16．6士2．07；发病极期：21．2士1．92；恢复期：5+1．00。经方差 分析、q检验(P0．05)有显著性差异。发病极期潜伏期 恢复期对照组。 结论：本研究首次用光镜，扫描电镜，透射电镜，TUNEL 技术检测凋亡细胞，对EAE大鼠不同病程的ME进行了系 统观察： 1 HE染色EAE各期室管膜细胞排列的密集程度，发病 极期潜伏期柔膜反应期和恢复期。 2在EAE模型上用扫描电镜首次发现在柔膜反应期时 ME的室管膜细胞分泌颗粒细小稠密；潜伏期数目减少，呈 小堆状分布；发病极期时分泌颗粒稀少，町见室管膜上有大 量吞噬细胞样细胞，而恢复期室管膜结构恢复正常。 3用透射电镜也观察到ME室管膜细胞不同形态的分泌 颗粒。 4 ME中的细胞凋亡数在EAE不同发病时期有明显差 异，发病极期潜伏期恢复期对照组。 关键词： 正中隆起；室管膜细胞；凋亡细胞；大鼠 扫描电镜；