丹参酮ⅱa微乳抗h22小鼠肝癌的研究药理学专业论文.docxVIP

大连医科大学 硕士学位论文 丹参酮ⅡA微乳抗H22小鼠肝癌的研究 姓名：马辉 申请学位级别：硕士 专业：药理学 指导教师：范青 201106 丹参酮II 丹参酮II A微乳抗H22d、鼠肝癌的研究 硕士生姓名： 马 辉 指导教师： 范 青 教授 指导小组： 吕慧怡张宁张策老师 专业名称： 药理学 摘 交iE 目的： 将抗肿瘤活性物质丹参酮ⅡA(Tan II A)制成靶向微乳 (microemulsion，ME)制剂，在体内外观察其对H22d、鼠肝癌的抗肿瘤 作用与机制。 方法： 体外实验中，实验组是Tan II A ME组，给药剂量分别是O．5pM和 21xM，对照组是0．5pM空ME组及2pM Tan II A溶液组。给药48h后， 倒置显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测Bcl．2的表达情况，并采 用RT-PCR方法检测TanII A ME对H22细胞Bcl．2、Bax、Caspase．3 mRNA 表达的影响。体内实验中，建立H22肝癌小鼠肿瘤模型，24小时后给药 治疗，随机分为6组，实验组为TanⅡA ME组，给药剂量分别是2、4、 8mg／kg，尾静脉连续给药7天；阴性对照组为4mg／kg空ME组及8mg／kg Tan II A溶液组，尾静脉连续给药7天；阳性对照组为25mg／kg 5-FU， 腹腔连续给药7天。给药7天后，观察小鼠体重、脾指数，计算抑瘤率， RT-PCR方法检测肿瘤组织中Bcl．2、Bax、Caspase．3 mRNA表达情况， 并采用双重免疫荧光组织化学染色检测Bel．2／Bax及Bcl．2／Caspase-3蛋 白的表达情况。 结果： 一、Tan II A溶液组细胞内Bel．2表达率为27．1 7，空ME组表达率为 28．68，O．5pM Tan II AME组表达率为27．36，、2“M Tan II AME组表达率 为2．65。 二、Tan II A溶液组中细胞内Bcl．2、Bax、Caspase．3 mRNA表达水平 与p．aetin的比值分别是0．10、1．55、0．75；空ME组中Bel．2、Bax、Caspase．3 mRNA表达水平与p．actin的比值分别是O．09、0．85、O．40；O．51aM Tan II A ME组中Bel．2、Bax、Caspase．3mRNA表达水平与13-aetin的比值分别是 ME组中Bel．2、Bax、Caspase．3mRNA表达水平与13-aetin的比值分别是 0．16、0．70、0．85；29M Tan II A ME组中Bel一2、Bax、Caspase．3mRNA表 达水平与13-actin的比值分别是O．33、0．44、1．24。 三、2、4、8mg／kg Tan II AME对H22肝癌小鼠肿瘤的抑瘤率分别为 1．32％、34．68％及47．1 7％，5．FU组小鼠的体重、脾指数显著降低。 四、TanII A溶液组肿瘤组织Bel．2、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平 与13-aetin的比值分别是0．65、1．23、0．12：空ME组中Bcl一2、Bax、Caspase一3 mRNA表达水平与B．actin的比值分别是0．26、1．34、0．09；5．FU组中Bel-2、 Bax、Caspase．3 mRNA表达水平与B．actin的比值分别是1．43、O．68、0．30； 2mg／kg Tan II A ME组中Bel-2、Bax、Caspase一3mRNA表达水平与D-aetin 的比值分别是O．87、O．97、0．09；4mg／kg TanII A ME组中Bcl-2、Bax、 Caspase-3mRNA表达水平与p-aetin的比值分别是1．06、0．94、O．18；8mg／kg Tan II A ME组中Bel．2、Bax、Caspase．3mRNA表达水平与D．aetin的比值分 别是1．36、0．59、0．3 1。 五、双重免疫荧光组织化学结果显示，Tan II A溶液组肿瘤组织中 Bax、Caspase一3表达较弱，Bcl一2表达丰富；4、8mg／kg TanⅡA ME组Bax、 Caspase．3表达显著增强，Bel．2表达减弱。 结论： 一、与Tan II A溶液相比较，Tan II A ME具有明显的促进小鼠肝癌H22 细胞凋亡作用，且呈浓度依赖性。 二、Tan II A ME对H22肝癌小鼠肿瘤有明显的抑制率，且呈浓度依赖 性，副作用较5．FU明显减小。 三、Tan II A ME抗肿瘤作用机制可能是通过上调Bax、Caspase．3、下 调Bcl．2基因的表达来实现的。 关键词：丹参酮II A微乳H22 Bel-2 Bax Caspase一3 2