光谱分析法-研究生.pptVIP

常见现代仪器分析技术：;第一章 光谱分析法;本章提要;第三节 分子发光光谱法;第一节 光谱分析法概论;（1）能源提供能量； （2）能量与被测物之间的相互作用； （3）产生信号。 基本特点： （1）所有光分析法均包含三个基本过程； （2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）； （3）涉及大量光学元器件。;二、电磁辐射的基本性质;三、辐射能的特性：;常用三种光分析法测量过程示意图 ;四、光谱分析分类;五、分子光谱法;分子的能级图与跃迁; 分子光谱分析法的分类 ;第二节 紫外/可见光吸收光谱法;紫外/可见光吸收光谱分析法： 利用溶液中分子吸收紫外和可见光产生跃迁所记录的吸收光谱图，可进行化合物结构分析，根据最大吸收波长强度变化可进行定量分析。属于分子吸收光谱法，分析波长范围一般为200~800nm。 ; 即光吸收基本定律;朗伯-比尔定律;透光率（透射比）T（Transmittance）;吸光度A、透射比T 与浓度c 的关系;k 吸光系数 （Absorptivity） ;溶液浓度的测定;朗伯-比尔定律的适用条件;吸光度的加和性与吸光度的测量;二、紫外/可见分光光度计主要部件;?/nm;氙灯;单色器（将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置）;光栅：（利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光的装置）;检流计（指示器）： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录;1. 单光束分光光度计;2. 双光束分光光度计;第三节 分子发光光谱法;分子发光;1575年，西班牙医生N.Monardes发现。 1852年，George Stokes对荧光产生的机理作了解释，并提出了“荧光”。 1867年，分子荧光首次用于分析测定。 1928年，Jette和West提出第一台光电荧光计。 1952年，商品荧光分光光度计出现。;The Discovery and Development of the Green Fluorescent Protein,（GFP ）绿色荧光蛋白;一、分子荧光（磷光）发生的原理; ; 1. 分子的多重态：单线态、激发单线态、激发三线态 单线态(S0) 一个所有电子自旋都配对的分子的电子状态。 多数有机物分子的基态是单线态。 当基态一对电子的一个被激发到较高能级时， 激发单线态(S) 自旋方向不改变，分子仍处于单线态。 激发三线态(T) 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。 ;S0;无辐射跃迁 振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高。 内转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回到低能级的分子内过程。 系间窜越：同一电子能级激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程。 外转换：激发态分子与溶剂或其他溶质相互作用、能量转换而使荧光 （或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的减弱或消失，称为荧光熄灭（或猝灭）。 ;辐射跃迁 荧光：受光激发的分子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。 由于是相同多重态之间的跃迁，几率较大，速度大，速率常数kf为106~109s-1 。 磷光：从第一激发三重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。 产生伴随自旋多重态的改变，辐射速度远小于荧光，寿命较长。;荧光与磷光的产生过程;;荧光;二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 （吸收光谱与发射光谱） ; 1.荧光(磷光)的激发光谱 (excitation spectrum) 固定测量波长（选最大荧光/发射波长），化合物发射的荧光(或磷光)强度与照射光波长的关系曲线。 2.荧光光谱(或磷光光谱) （fluorescence spectrum） 固定激发光波长（选最大激发/吸收波长）， 化合物发射的荧光(或磷光)强度与发射光波长关系曲线。 3. 最大激发波长(λex)和最大荧光波长(λem);室温下菲的乙醇溶液荧（磷）光光谱;激发光谱与发射光谱的关系;镜像规则的解释 ;镜像规则的解释 ;三、影响荧光强度的因素;分子产生荧光必须具备的条件： ;某些化合物的荧光效率;化合物的结构与荧光;（a）萘： 荧光效率为0.29； 荧光波长为310 nm。;具有刚性不饱和平面结构的分子 ;反式：平面构型 强荧光体;例 金属螯合物;苯环上取代基的类型：;温度：温度越高，荧光降低;pH对荧光强度的影响;四、荧光光谱仪 ;;荧光光度计光路图; 荧光分光光度计的的主要部件 激发光源：稳定、具有一定强度（300~400nm) 样品池：低荧光材料，常用石英池，方形 检测器：较