组织免疫组化操作-博奥森.PDFVIP

北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO. LTD. ， Tel：010 Fax：010 Web： E-mail：bioss@ 免疫组化操作步骤 （石蜡切片）—三步法 A. 所需溶液和试剂 1. 磷酸盐缓冲液 (C01-01001)：0.1M 1XPBS （PH7.4） 2. 固定液：4%多聚甲醛溶液 （无甲醇）(C01-06002) 3. 抗体稀释液(C-0007)：1%BSA,0.03%Proclin300 的0.1MPBS 4. 抗原修复液 （C02-02001）：柠檬酸钠缓冲液 5. SP 免疫组化检测试剂盒(兔) （SP-0023） 6. DABkit (20×) (C02-04001):二氨基联苯胺/DAB 染色试剂盒 7. 中性树胶封片剂(C02-05001) B ．操作步骤 1. 60℃烤片 2 小时 2. 脱蜡。二甲苯脱蜡 15 分钟，三次 3. 水化。依次经过无水乙醇、95%、90%、80%、70%，各 5 分钟，蒸馏水 （或自 来水）5 分钟 4. PBS （洗液C01-01001）洗 5 分钟，三次 5. 抗原修复。枸橼酸缓冲液 （修复液，C02-02001）（约 92-95℃）煮沸 （沸水 浴）修复 15 分钟，自然凉至室温。PBS 洗 5 分钟，三次 6. 3%双氧水 （包含在 SP-0023 中）封闭 20 分钟，PBS 洗 5 分钟，三次 7. 正常山羊血清 （包含在 SP-0023 中）封闭，37℃20 分钟 8. 一抗孵育，4℃过夜. （抗体稀释液 C-0007） 9. 复温 20 分钟，PBS 洗 5 分钟，三次 10.二抗孵育，37℃20 分钟（二抗为生物素标记的羊抗兔 IgG，包含在 SP-0023 中），PBS 洗 5 分钟，三次 11.三抗孵育，37℃20 分钟（三抗为辣根酶标记的链酶亲和素，包含在 SP-0023 北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO. LTD. ， Tel：010 Fax：010 Web： E-mail：bioss@ 中），PBS 洗 5 分钟，三次 12.DAB （显色剂 C02-04001）显色，镜下观察结果，适时终止 13.苏木素复染 5 分钟，自来水冲洗片刻，1%的盐酸酒精 （75%）溶液分化 30 秒，自来水冲洗 5 分钟蓝化 14.脱水。依次经过 70%、80%、90%、95%、无水乙醇，各 5 分钟，二甲苯 15 分 钟，三次 15.封片，中性树胶 （C02-05001）封片 16.图像分析软件 3DHISTECH Pannoramic SCAN 数字扫描