肠道菌群与小细胞肺癌化疗相关性腹泻关系的研究肿瘤学专业论文.docxVIP

目 目 录 一、摘要 ．1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 6 (一)前言(一)日U舌 66 (二)材料和方法 8 1．材料 ．．8 1．1 实验样本收集 ．8 1．2 实验试剂 ．．8 1．3 实验仪器 ．．9 1．4 实验数据分析软件 10 2．方法 ．10 2．1粪便样本DNA提取及浓度检测 10 2．2 PCR．DGGE分析 1 1 2．3 统计分析 ．1 3 (三)结果 ．．14 1．DNA样本提取情况 ．14 2．样本DNA PCR扩增情况 1 5 3．A组样本化疗前与化疗后出现CID的肠道菌群变化 1 5 3．1 A组样本化疗前后肠道菌群DGGE分析 ．1 5 万方数据 3．2切胶测序 3．2切胶测序 ．19 4．B组样本化疗前与化疗后出现CID的肠道菌群变化 19 4．1 B组样本化疗前后肠道菌群DGGE分析 19 4．2切胶测序 22 (四)讨论 ．．23 (五)结论 24 (六)参考文献 25 三、综述 ．28 (一)综述 ．．28 (二)参考文献 33 四、致谢 ．．36 万方数据 大连医科大学硕士学位论文肠道菌群与小细胞肺癌化疗相关性腹泻关系的研究 大连医科大学硕士学位论文 肠道菌群与小细胞肺癌化疗相关性腹泻关系的研究 硕士生姓名：鱼芳 指导教师：陈骏教授 指导小组：李明副教授 专业名称：肿瘤学 摘要 研究背景： 小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer，SCLC)是一种高侵袭性的神经内分泌肿 瘤，它具有发展迅速、早期出现远处转移、对化疗高度敏感，但容易复发等特点n1， 超过半数的患者在确诊时处于广泛期晗q1(Extensive disease，ED)。依据最新NCCN 指南，SCLC的治疗仍以全身化疗为主n1。化疗相关性腹泻(Chemotherapy Induced Diarrhea，CID)是化疗常见的并发症，轻则会导致患者的体质和生活质量的下降， 降低患者的依从性，影响化疗的疗效，增加治疗费用，严重时，还可引起患者体 内水、电解质紊乱，造成低血容量性休克，进而危及生命[4-71。目前关于CID的具 体发病机制仍不清楚，有研究报道肿瘤CID与肠道菌群的改变有关，探究肠道菌 群的改变与SCLC化疗相关性腹泻的关系，对SCLC患者的治疗和生存具有深远 意义。 目的： 探索小细胞肺癌化疗相关性腹泻与肠道菌群变化的关系，为小细胞肺癌化疗 相关性腹泻的防治提供新思路。 方法： l、样本收集：采集大连医科大学附属第二医院肿瘤科1 8例经病理确诊为小 细胞肺癌患者，化疗前和化疗后出现CID的粪便(其中10例患者经EP方案化疗， 8例经IP方案化疗)，放置于．80℃冰箱冷冻保存。 2、样本DNA提取：分别提取小细胞肺癌患者化疗前和化疗后出现CID粪便 样本的肠道微生物基因组DNA。 万方数据 大连医科大学硕士学位论文3、聚合酶链式反应．变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)：以粪便总DNA为模 大连医科大学硕士学位论文 3、聚合酶链式反应．变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)：以粪便总DNA为模 板，细菌16S rDNA V3区特异性引物进行PCR扩增，扩增产物行1．5％的琼脂糖 凝胶电泳，以检测目的条带，进一步行DGGE，对所得DGGE指纹图谱进行分析， 对差异比较明显的条带进行切胶测序，以分析其种属类别，探索小细胞肺癌患者 化疗前与化疗后出现CID的肠道菌群变化。 结果： l、DNA提取情况：18例SCLC患者化疗前和化疗后出现CID的粪便均可提 取出DNA，各DNA样本浓度高低不同。 2、EP方案化疗组的肠道茵群特征：由聚类分析和PCA主成分分析图可以看 出，化疗前组与化疗后组形成了两个聚类群，差异显著。与化疗前组相比，化疗 后组肠道细菌丰度增加(P0．05)；多样性指数升高(P0．05)，差异均无统计 学意义。对化疗后亮度明显增高的l、2、3条带进行切胶测序，结果显示，条带l、 2可能为普氏粪杆菌(Faecalibacteriumprausnitzii)，同源性分别为85％和93％； 条带3为肺炎克雷伯菌(Klebsiella quasipneumoniae)，同源性为99％。 3、IP方案化疗组的肠道菌群特征：由聚类分析和PCA主成分分析图可以看 出，化疗前组与化疗后组形成了两个聚类群，差异显著。与化疗前组相比，化疗 后组肠道细菌丰度降低(P0．05)，差异无统计学意义；多样性指数降低(P0．05)， 差异有统计学意义。对化疗后亮度明显降低的4、5条带进行切胶测序，结果显示， 条带4可能为杆菌属(Prevotella stercorea)，同源性为94％；条带5可能为Uncultured bacterium，同源性为81％。 结论： 1、EP方案所致的小细胞肺癌CI