雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响及其机制的探讨生理学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 目的研究17-13雌二醇对大鼠大脑皮层星形胶质细胞(AS)缺 氧、缺糖损伤的影响，并对其可能的机制进行初步探讨。 方法 原代培养Sprague-Dawl ey大鼠大脑皮层AS，建立缺氧、 缺糖损伤模型，以吉姆萨染色观察细胞形态学变化；以透射电镜观察 细胞超微结构尤其是凋亡小体的变化；以四甲基偶氮唑盐(MTT)还 原实验检测细胞活力；以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指 标；以流式细胞术检测细胞凋亡率，研究氧糖剥夺(OGD)对AS的影 响。在此基础上，通过钙离子敏感的荧光探针Fura-2／AM负载细胞， 荧光双波长分光光度计检测细胞内钙离子浓度的变化；以黄嘌呤氧化 酶法、硫代巴比妥酸法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二 醛(MDA)含量的变化；免疫细胞化学染色和RT-PCR方法观测凋亡相 关分子Caspase-3和Caspase-12在OGD前后的变化。 结果①17-13雌二醇增强细胞活力的效应lOnmol／L开始出现， 在20nmol／L达到最高峰；降低LDH漏出率和抗凋亡效应均从inmol／ L开始，也是在20nmol／L达到最高峰。②缺氧缺糖处理即刻、缺氧 缺糖处理前6h、12h、24h、36h，加入终浓度为20nmol／L的17—13雌 二醇，均使缺氧缺糖损伤AS细胞活力增高，LDH漏出率降低，细胞 凋亡率降低。其中缺氧缺糖处理前24h加入17一B雌二醇在上述5个 时间点中，增强细胞活力的效应最强。③缺氧缺糖损伤可使细胞内游 离钙离子浓度显著增高，17-B雌二醇预处理后可明显降低钙离子浓 度，调节钙稳态失衡。④缺氧缺糖损伤可致AS内SOD活性降低，MDA 含量升高，17-B雌二醇预处理后可显著升高SOD活性，降低MDA的 含量。⑤RT—PCR和免疫细胞化学染色结果显示，缺氧缺糖可使AS内 凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-12的表达增加，17-13雌二醇预 处理后可显著抑制两者的表达。 结论①17-13雌二醇对体外培养AS缺氧、缺糖损伤具有直接的保护 作用，并呈一定的量效、时效关系。②17-B雌二醇可能通过调 节钙离子浓度、Caspase-3和Caspase一12的表达对缺氧、缺糖 损伤AS发挥保护作用。③17-B雌二醇对缺氧、缺糖损伤皮层 AS的保护作用可能与提高SOD活性或降低其消耗率，从而抑制 AS的保护作用可能与提高SOD活性或降低其消耗率，从而抑制 缺氧、复氧过程中大量生成的氧自由基对DNA和细胞器膜等的损 伤有关；可能与降低脂质过氧化反应有关。 关键词星形胶质细胞，雌激素，凋亡，氧糖剥夺 Ⅱ ABSTRACTobjective ABSTRACT objective To investigate the effects of 1 7-13 estradiol on cerebral cortical astrocytes subjected to oxygen—glucose deprived injury and explore the mechanisms mediated the effects． Methods Primary cultured cerebral cortical astrocytes were prepared from Sprague—Dawley rats，and a cell damage model was induced by oxygen-glucose deprivation(OGD)．The change of cell morphology was observed by Giemsas staining and transmission electron microscope ．The cell damage and viability were evaluated bV 3一[4，5-dimehyl-2-thiazolyl]一2，5-diphenyl-2H—tetrazolium bromide(MTT) reduction assay and lactate dehydrogenase(LDH)released rate．and the detection of apoptotic cells was determined by the flow cytometry．We studied the effects of 1 7-13 estradiol on astrocytes by the model．Then we detected the concentration of intracellular Ca十by fluorescence duel wavelength spec