猪粪便中伊维菌素排泄及降解规律的研究.docVIP

猪粪便中伊维菌素排泄及降解规律的研 摘要：通过建立检测猪粪便中伊维菌素含量的HPLC方法，研究伊维 摘要：通过建立检测猪粪便中伊维菌素含量的HPLC方法，研究伊维 素在猪 粪便中的排泄规律，并在实验室条件下研究光照、温度和微生物因素对猪粪中伊 维菌素降解的影响。结果表明，健康育月巴猪分别混饲给予30. 100、200 mg/kg 的伊维菌素后，可在混饲给药后1 d的猪粪便中检测到伊维菌素，猪粪中伊维菌 素排泄量在采食后3.5 d达到最高峰，峰浓度分别为13.58. 30.11. 52.16 mg/kg ,并于144、168. 168 h时检测不到伊维菌素。在伊维菌素初始浓度分 别为20、40、80 mg/kg的猪粪中，避光条件下，其平均半衰期为126.64 d , 而光照条件下的平均半衰期仅为55.16 do相同伊维菌素浓度的猪粪在15、25、 35 °C时的半衰期随温度升高有缩短趋势，而50 °C时半衰期较15 °C时延长。 在未灭菌、灭菌及灭菌后添加伊维菌素高效降解菌的情况下,3组的平均半衰期 分别为62.9、113.2.辽1 do由此可见，应重视伊维菌素原形进入环境后的生 态毒理学效应，必要时适当延长其休药期，另外还可以通过加强光照、堆肥和添 加一定浓度的高效降解菌来加速猪粪中伊维菌素的降解，减少环境中药物的残 留。 关键词：猪粪；伊维菌素；排泄；降解 伊维菌素是一种广谱、高效、安全和用量小的大环内酯类抗寄生虫药，其应 用非常广泛。2003年伊维菌素被注册用于治疗人圆线虫病，在日本伊维菌素被 用于控制老人的疥疮突发症[1] o养猪场通过饲喂含伊维菌素的饲料或使用伊维 菌素注射液抗猪体内外寄生虫。药物大部分以原形形式随畜禽粪便排出体外，这 些含有伊维菌素的粪便直接或以施肥方式进入土壤或水体,导致环境中伊维菌素 残留及其耐药菌株的增加。因此，猪场对猪粪的处理方式直接影响药物的环境残 留及生态效应。国内外许多文献相继报道阿维菌素类药物在一些动物及水产品体 内残留消除规律的研究工作，如阿维菌素在绵羊粪［2］,多拉菌素在犬［3］、猪粪 ⑷、绵羊粪［2］中残留消除规律，但到目前为止，伊维菌素在猪粪中的残留消除 规律的研究未见报道。 本试验在建立猪粪中伊维菌素HPLC检测方法的基础上研究商品肉猪饲喂 含不同剂量伊维菌素的饲料后猪粪中伊维菌素浓度的变化规律，为伊维菌素药代 动力学和生态毒理学方面的硏究提供参考。另外，在外界环境中，光照、温度和 微生物等因素都会影响化学物质稳定性及环境残留，因此本试验拟在实验室条件 下研究光照、温度和微生物因素对猪粪中伊维菌素降解规律的影响,为硏究畜禽 排泄物作为肥料的安全性及可能对生态环境的影响提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料 LL1试验动物35日龄体质量、健康状况相近的商品猪40头,购自扬州市 和江区富得养猪场，平均体质量（30±1 ） kg。试验前预饲1周,预饲料中不添 加任］可兽药。 1.1.2猪粪采集健康猪的新鲜粪样,经检测不含伊维菌素,用于猪粪中伊维 菌素降解规律硏究。 1.13试剂与仪器伊维菌素原料药，含量97.3% ,浙江升华拜克生物股份有 限公司产品。乙月青、甲醇均为色谱纯,其他化学试剂均为国产分析纯。高效液相 色谱仪（配LC-10ATVP泵、SPD-10ATVP紫外检测器），日本岛津公司产品；0DS-2HYPERSIL ( 250 mmx4.6 mm z 5 pm )不锈钢色谱柱,菲罗门科技产 品;Agilent SPE固相萃取小柱(500 mg/3 mL ),美国Agilent公司产品。 1.2猪粪中伊维菌素浓度的测定 样品前处理：取L0 g猪粪z加入10 mL乙月青,涡旋混合2 min z超声萃 取10 min , 5 000 r/min离心10 min z取上清于另一干净离心管中，沉淀再加 入5 mL乙月青，按上述方法重复提取1次。混合2次的上清液，在上清液中加入 15 mL乙月青饱和的正己烷溶液，混匀后4弋静置20 min ,弃去分层后的上层正 己烷液，取下层液体过固相萃取小柱。固相萃取小柱先用1 mL甲醇激活J mL 水平衡，然后再将下层液体过柱。加30%甲醇水溶液清洗小柱，再用93%甲醇 水溶液洗脱。洗脱液13 000 r/min 4艾离心10 min z取上清液过滤后待测。 色谱条件：流动相甲醇：水二93 : 7 (体积比)，流速1 mL/min，检测 波长245 nm ,柱温30 °C ,进样量20 pLo 13试验方法 1.3.1伊维菌素在猪粪便中的排泄规律将40头猪随机分为4组每组10头。 各组给药情况如下第1组空白组点卩不添加任何兽药，第2 ~ 4组分别以含30、 100、200 mg/kg 100、200 mg/kg 伊维 素的全价饲料饲喂1次。各组