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胞嘧啶脱氨酶apobec3g和apobec3f抗病毒调控机制的研究肿瘤学专业论文
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常用实验仪器和试剂
实验设备
微量移液器Gi}son公司,法国 台式离心机(Biofuge pica))Heraeus公司,德国
低温高速离心机(Biofuge28RS)Hemeus公司,德国 紫外分光光度计((3enQuant)Pharmacia Bioteek公司,瑞典 PE2400 PCR仪Perkin Elmer公司,美国
水平电泳仪Bio-Rad公司,美国 IS01000凝胶数字成像系统AlpHa Innteck公司,美国 7700型实时荧光定量PCR仪Perkin Elmer公司,美国 AT2611/10000电子天平Mettler公司,美国 雪花状制冰机Ross Temp公司,美国
-70(2深低温冰箱Sanyo公司,日本 真空冷冻干燥仪Savant Modulyo Savant公司,美国 Milli-Q50纯水器Millilx)re公司,美国
细菌恒温摇床(Orbital Shaker) Forma Scinetific公司,德国
电熟恒温水浴箱上海医疗器械厂
TH2-C恒温振荡器江苏太仓实验设备厂 细胞培养箱Hemeus公司,德国
OpsysMR TM CB372酶标仪Dynex Heraeus公司,美国 相差倒置显微镜Olympus公司,日本 细菌培养箱(WGP.300) 重庆四达实验仪器
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实验试剂
RPMI-1640培养基GIBCO公司,美国 DMEM培养基GIBCO公司,美国 小牛血清杭州四季青公司 胎牛血清GIBCO公司,美国 脂质体Lipofectamine 2000 Invitxogen公司,美国 提总RNATrizol试剂Inviliogen公司,美国 RNeasyM砬Kit试剂Qiagen公司,德国 MMLV逆转录酶Promega公司,美国
Oligo dT Promega公司,美国 Taq酶Promega公司,美国 琼脂糖(Agrose)Promega公司,美国 溴化乙锭(EB) Signm公司,美国 DL2000DNAmarker Takara公司,日本
PCR产物回收试剂盒Qiagen公司,德国 胰蛋白胨上海生工生物工程公司 酵母提取物上海生工生物工程公司 限制性内切酶Takara公司,日本 二甲基亚砜(DMSO) Sigma公司,美国 T4-DNA连接酶Promega公司,美国
异丙基硫代一13--D--*乳糖苷(矿I.G) 上海生工生物工程公司 5溴一4氯一3吲哚一B—D一半乳糖苷(X.gal) 上海生工生物工程公司
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浙江大学博士学位论文胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G和APOBEC3F
浙江大学博士学位论文
胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G和APOBEC3F 抗病毒调控机制的研究
浙江大学医学院 肿瘤学 博士研究生 应松成
导 师 于晓方李泼
徐荣臻研究员 中文摘要
一些细胞内的分子被发现是宿主抵抗病毒感染的第一道防线.胞嘧啶脱氨 酶APOBEC家族的蛋白可以通过其脱氨酶活性导致病毒基因组DNA产生超 突变或以一种未知的非编辑方式抑制病毒的复制。APOBEC3G(A3G)是该 家族成员中第一个发现具有抗HIV-1功能的蛋白。目前发现A3G具有广谱的 抗乙肝病毒(ⅢⅣ),内源性转座子和逆转录病毒活性.APOBEC3F(A3F) 也被发现具有类似的功能。它们可以被包裹进HIV-1病毒颗粒,在新感染细胞 中使逆转录时合成的病毒eDNA上的脱氧胞嘧啶脱氨形成脱氧尿嘧啶从而导 致病毒基因组上产生大量的G到A致死突变。除了该经典的抗病毒模式,它 们还可以通过一种非编辑突变的形式起到限制病毒复制作用。然而HIV.1的 vif蛋白能通过Cullin5-E3泛素化连接酶介导的蛋白酶体(proteasome)依赖途 径使A3G和A3F降解。因此宿主A3G/A3F和病毒vif的相互作用可以影响到 HIV-1的发病过程。在病毒产生细胞中A3G/A3F的量很大程度上决定了它们 在新感染细胞中抗HIV-1的能力,故在体内诱导A3G/A3F表达被认为是一种 有效的抗病毒策略。
一、o干扰索调控抗病毒因子APOBEC3G不依赖经典STATl信号通路但具有细 胞类型依赖性
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浙江大学博士学位论文 摘要
于扰素常用于治疗病毒感染疾病。经典的IF]q.-G诱导转录途径是通过 STATl:STAT2异源二聚体同干扰素调节因子(IRF)-9形成复合体,该复合 体再结合到IFN应答相关基因启动子的IFN刺激反应元件(ISRE)上。IFN-y 途径使用STATl同源二聚体直接结合到启动子区的IFN-y刺激反应元件上, 并不需要IRF。
本研究用qRT-PCR检测了
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