用于临床研究的血浆中氟尿嘧啶的分析方法-Waters.PDF

[ 应用纪要 ] 用于临床研究的血浆中5-氟尿嘧啶的分析方法 Stephen Balloch 、Lisa Calton和Gareth Hammond 沃特世公司(英国威姆斯洛) 应用优势 简介 ■ 利用色谱和质谱检测提高分析的选择性 5-氟尿嘧啶是一种抗肿瘤制剂，其通过干扰脱氧核糖核酸(DNA)合成以及小范 ■ 宽泛的动态范围(范围拓宽100倍) 围抑制核糖核酸(RNA)形成抑制肿瘤生长。由于5-氟尿嘧啶代谢的个体差异非 常大1 ，灵敏度和选择性俱佳的测定方法将有助于5-氟尿嘧啶的药代动力学和 ■ 样品制备过程简单、经济，仅使用 药效动力学临床研究。 极少的样品 本文将介绍一种临床研究方法，该方法在添加内标(5-氟尿嘧啶-13C15 N )之后， 2 ■ 分析速度快 TM TM 对血浆样品进行液液萃取。然后使用配备Waters ACQUITY UPLC HSS PFP色谱柱(2.1 x 100 mm, 1.8 µm)的ACQUITY UPLC I-Class系统进行色谱分 离，所需时间仅为3 min，最后在XevoTM TQD质谱仪上进行检测(图1)。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC I-Class系统 ACQUITY UPLC HSS PFP色谱柱 Xevo TQD MassLynx™ 软件 图1. ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQD联用系统。 TargetLynx™ 应用管理软件 关键词 5-氟尿嘧啶(5-FU)，UPLC-MS/MS 1 [ APPLICAT ION NOT E ] [ 应用纪要 ] 实验 样品制备：5-氟尿嘧啶认证参比标准品及其稳定标记内标(13C15 N )购自Toronto Research Chemicals(加拿大安大略省多伦多)。使用购 2 自Golden West Biologicals(美国加利福尼亚州特曼库拉)的混合血浆作为替代基质制备校准品。5-氟尿嘧啶的标准曲线范围为 20~2000 ng/mL。使用相同的混合血浆分别制备浓度为40、350、750和1500 ng/mL的QC样品。 样品萃取：向50 µL样品中添加5 µL 10 µg/mL溶于甲醇的内标(ISTD)，旋涡混合30 s。加入500 µL含0.1% 甲酸(体积比)的乙酸乙酯溶 液，旋涡混合30 s，然后以16,100 g 的离心力离心2 min。取400 µL上清液在40 °C下氮气吹干。用75 µL 0.1% 甲酸水溶液复溶后，在 UPLC-MS/MS上分析。 LC条件 MS条件 系统: ACQUITY UPLC I-Class (FT N) 系统: Xevo TQD 进样针: 30 µL 分辨率: MS1 (0.